Ki67反義核酸載體對(duì)乳腺癌細(xì)胞的抑制效應(yīng)及相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分：乳腺癌細(xì)胞Ki67表達(dá)與其增殖、侵襲能力相關(guān)性的研究 目的：研究細(xì)胞增殖抗原Ki67在不同乳腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)，探討其與乳腺癌細(xì)胞惡性表型的關(guān)系。方法：采用半定量RT-PCR和Westernblot分別檢測3株乳腺癌細(xì)胞中Ki67mRNA和蛋白表達(dá)水平。MTT檢測乳腺癌細(xì)胞株的增值能力。Transwell檢測乳腺癌細(xì)胞株的遷移及侵襲能力。結(jié)果：3株乳腺癌細(xì)胞Ki67轉(zhuǎn)錄和翻譯水平呈同步變化(P＜0.05)，均為MDA-

2、MB-435s最高，MDA-MB-231稍低，MCF-7最低。增殖、侵襲能力亦為MDA-MB-435s最強(qiáng)，MDA-MB-231次之，MCF-7最弱。結(jié)論：3株乳腺癌細(xì)胞Ki67mRNA和蛋白水平與細(xì)胞增殖、侵襲能力呈正相關(guān)，提示Ki67在乳腺癌發(fā)生演進(jìn)中可能作為獨(dú)立因素起重要作用，有望成為治療的新靶點(diǎn)。 第二部分：Ki67反義核酸對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲能力的抑制及相關(guān)機(jī)制的研究 目的構(gòu)建增殖核相關(guān)抗原(Ki67)反義核

3、酸載體，并研究阻斷Ki67基因的表達(dá)對(duì)MDA-MB-435s細(xì)胞生物學(xué)行為的抑制效應(yīng)。方法用基因重組方法將人Ki67基因cDNA保守序列反向克隆到真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-C1中，構(gòu)建人反義Ki67核酸載體。然后通過脂轉(zhuǎn)法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染MDA-MB-435s細(xì)胞系，用RT-PCR和Westernblot檢測轉(zhuǎn)染前后Ki67mRNA和蛋白的表達(dá)；MTT、Boyden分別檢測增殖及侵襲能力變化；流式細(xì)胞儀檢測凋亡率改變。結(jié)果轉(zhuǎn)染Ki67反義核酸載體

4、組的MDA-MB-435s細(xì)胞Ki67mRNA和蛋白表達(dá)明顯低于對(duì)照組，分別下調(diào)48％、72％；且細(xì)胞增殖受抑制，體外侵襲能力也明顯降低；流式結(jié)果凋亡率達(dá)26.16±0.06％；與對(duì)照組相比差異均有顯著性意義(P＜0.05)。結(jié)論阻斷Ki67的表達(dá)可顯著抑制乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-435s的增殖、侵襲能力，并促進(jìn)其凋亡。提示Ki67可以作為乳腺癌治療的新靶點(diǎn)。 第三部分：乳腺癌細(xì)胞增殖活性與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 目的：探討

5、細(xì)胞增殖抗原標(biāo)記物Ki67在乳腺導(dǎo)管癌中的表達(dá)及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床指標(biāo)的相關(guān)性。方法：采用免疫組化方法，檢測60例乳腺導(dǎo)管癌及鄰近正常組織中Ki67表達(dá)，并將表達(dá)結(jié)果與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及臨床病理特征進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：60例乳腺導(dǎo)管癌中有51例Ki67表達(dá)(85％)，而癌旁及正常乳腺組織散在性弱表達(dá)或無表達(dá)。Ki67在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)評(píng)分中位數(shù)為3.9，而在非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組評(píng)分中位數(shù)為2.0，差異有顯著性(P＜0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移至Le