MTB PhoPR雙組分系統(tǒng)過表達對MTB致病性的影響及機制研究.pdf

1、目的：
　　探討研究結(jié)核分枝桿菌PhoPR雙組分系統(tǒng)過表達對結(jié)核分枝桿菌致病性的影響及其機制。
　　方法：
　　構(gòu)建及鑒定重組穿梭質(zhì)粒pMV361-PhoP和pMV361-PhoR，利用電轉(zhuǎn)化技術(shù)將重組穿梭質(zhì)粒分別導入至H37Rv和H37Ra的感受態(tài)細胞中構(gòu)建過表達菌株,并利用實時熒光定量PCR技術(shù)進行檢測和鑒定，將各過表達各菌株及對照菌株分別感染巨噬細胞，通過CFU菌落計數(shù)方法檢測各菌株在被感染巨噬細胞內(nèi)的增殖能力，

2、通過流式細胞技術(shù)檢測被感染巨噬細胞的凋亡率。
　　結(jié)果：
　　1.構(gòu)建及鑒定了重組穿梭質(zhì)粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR；
　　2.構(gòu)建及鑒定了PhoPR雙組分系統(tǒng)中PhoP/PhoR基因過表達的H37Rv::PhoP菌株，H37Rv::PhoR菌株，H37Ra::PhoP菌株，H37Ra::PhoR菌株；
　　3.CFU菌落計數(shù)檢測結(jié)果顯示：與對照組H37Ra菌株組菌落計數(shù)相比較，H37Ra::

3、PhoP菌株組在感染的第0.5天無顯著變化，在感染的第1天、第3天菌落數(shù)顯著增高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05）;H37Ra::PhoR菌株組在感染的第0.5天、第1天、第3天均無顯著變化。與對照組H37Rv菌株組菌落計數(shù)相比較，H37Rv::PhoP菌株組在感染的第0.5天無顯著變化，在感染的第1天、第3天菌落數(shù)顯著增高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05）;H37Rv::PhoR菌株組在感染的第0.5天、第1天、第3天均無顯著變化

4、；
　　4.流式細胞技術(shù)檢測結(jié)果顯示：與對照組H37Ra菌株組相比較，H37Ra::PhoP菌株組在感染的1h、12h、24h均無顯著變化;在感染的6h有顯著增高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);H37Ra::PhoR菌株組在感染的1h、6h、12h、24h均無顯著變化。與對照組H37Rv菌株組相比較，H37Rv::PhoP菌株組在感染的1h、6h、12h、24h均無顯著變化;H37Rv::PhoR菌株組在感染的1h、6h、12

5、h、24h均無顯著變化。
　　結(jié)論：
　　1.成功構(gòu)建了重組穿梭質(zhì)粒pMV361-PhoP和 pMV361-PhoR；
　　2.成功構(gòu)建了PhoPR雙組分系統(tǒng)中PhoP/PhoR基因過表達的H37Rv::PhoP菌株，H37Rv::PhoR菌株，H37Ra::PhoP菌株，H37Ra::PhoR菌株；
　　3. MTB PhoPR雙組分系統(tǒng)中PhoP基因過表達可能使MTB的致病性增強，PhoR基因過表達對MTB的