硫化氫及炔丙基半胱氨酸抗阿爾茨海默病研究.pdf

1、[目的]
　　炎癥在中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性變疾病如阿爾茨海默病(Alzheimer’S disease,AD)、帕金森病(Parkinson’s disease,PD)等的發(fā)病機制中起重要作用。硫化氫(hydrogen sulfide,H2S)是近年來在繼一氧化氮、一氧化碳后被認為是第三個氣體信號分子。本研究旨在首先觀察外源性H2S供體硫氫化鈉(sodiumhydrosulfide,NaHS)對雙側(cè)腦室注射脂多糖(lipopolysa

2、ccharide,LPS)誘導的大鼠神經(jīng)炎癥模型的影響,再觀察內(nèi)源性H2S供體炔丙基半胱氨酸(S-propargyl-cysteine,SPRC)對該模型的影響,最后觀察SPRC對右側(cè)腦室注射淀粉樣蛋白(beta-amyloid,Aβ)神經(jīng)毒性的影響,并分別探索其可能的作用機制,旨在研究有效的AD治療藥物。
　　[方法]
　　1.雙側(cè)腦室注射LPS誘導大鼠的神經(jīng)炎癥模型,以布洛芬(ibuprofen,IBU)灌胃為陽性對照,

3、Morris水迷宮觀察腹腔注射NaHS對大鼠學習記憶功能的影響;行為學檢測結(jié)束后,測定大鼠海馬的H2S水平;透射電鏡觀察大鼠海馬Cal區(qū)神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu);real time RT-PCR法測定大鼠海馬腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)及TNF-α受體1(TNF-α receptor 1,TNFR1)的Mrna表達;Western blot檢測大鼠海馬TNF-α及TNFR1的蛋白表達、IκB-α的降

4、解以及NF-Κb p65的磷酸化情況;
　　2.雙側(cè)腦室注射LPS誘導大鼠的神經(jīng)炎癥模型,以IBU灌胃為陽性對照,Morris水迷宮觀察腹腔注射不同劑量的SPRC對大鼠學習記憶功能的影響;行為學檢測結(jié)束后,測定大鼠海馬的H2S水平;透射電鏡觀察大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu);real time RT-PCR法測定大鼠海馬TNF-α、TNFR1及淀粉樣前體蛋白(amyloid-β protein precursor,AβPP)的M

5、rna表達;Western blot檢測大鼠海馬TNF-α、TNFR1及AβPP的蛋白表達、IκB-α的降解以及NF-Κb p65的磷酸化情況;
　　3.通過右側(cè)腦室注射Aβ25-35的大鼠神經(jīng)毒性模型,以多奈哌齊(donepezil,DON)灌胃為陽性對照,Morris水迷宮觀察腹腔注射不同劑量的SPRC對大鼠學習記憶功能的影響;行為學檢測結(jié)束后,透射電鏡觀察大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu);real time RT-PCR法測

6、定大鼠海馬TNF-α、AβPP及環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的Mrna表達;Western blot檢測大鼠海馬TNF-α、AβPP、COX-2的蛋白表達、IκB-α的降解以及NF-Κb p65、ERK、AKT的磷酸化情況。
　　[結(jié)果]
　　1.雙側(cè)腦室注射LPS可引起大鼠的學習記憶功能減退及海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)損傷,海馬的H2S水平明顯降低,且海馬TNF-α、TNFR1、AβPP的

7、Mrna及其蛋白表達明顯增加,海馬IκB-α的降解增多并加重NF-κBp65的磷酸化;
　　2.腹腔注射NaHS明顯減輕LPS誘導的大鼠的學習記憶功能減退及海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)損傷,增加海馬的H2S水平,降低海馬TNF-α、TNFR1的Mrna及其蛋白表達,阻遏海馬IκB-α的降解及NF-κB3p65的磷酸化,對假手術(shù)大鼠未見明顯影響;
　　3.腹腔注射SPRC(40,80mg/kg)明顯減輕LPS誘導的大鼠的學習記

8、憶功能減退及海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)損傷,增加海馬的H2S水平,降低海馬TNF-α、TNFR1、AβPP的Mrna及其蛋白表達,阻遏海馬IκB-α的降解及NF-κBp65的磷酸化;
　　4.右側(cè)腦室注射Aβ25-35引起了大鼠的學習記憶功能減退及海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)損傷,增加TNF-α、AβPP、COX-2的Mrna表達及其蛋白表達,促進ERK的磷酸化,增加IκB-α的降解以及NF-κBp65的激活,降低AKT的磷酸化

9、;然而,腹腔注射SPRC(40,80m/kg)明顯減輕Aβ25-35誘導的大鼠的學習記憶功能減退及海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)損傷,降低了TNF-α、AβPP、COX-2的Mrna及其蛋白表達,抑制ERK的磷酸化,抑制IκB-α的降解以及NF-κBp65的激活,增加了AKT的磷酸化水平。
　　[結(jié)論]
　　1.H2S可減輕LPS誘導的大鼠學習記憶功能減退及海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)損傷,其機制至少與抑制NF-Κb信號通路而

10、抑制促炎介質(zhì)的產(chǎn)生有關(guān);
　　2.SPRC可減輕LPS誘導的大鼠學習記憶功能減退及神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)損傷,其機制至少與調(diào)節(jié)內(nèi)源性H2S生成,抑制NF-Κb信號通路而抑制促炎介質(zhì)及AβPP的產(chǎn)生有關(guān);
　　3.SPRC可減輕Aβ25-35誘導的大鼠學習記憶功能減退及神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)損傷,其機制與抑制海馬TNF-α、AβPP、COX-2的Mrna及其蛋白表達,抑制ERK的磷酸化水平,抑制IκB-α的降解以及NFκBp65的激活,增