刺參無(wú)公害綠色育苗和保苗技術(shù)研究.pdf

1、刺參養(yǎng)殖業(yè)是我國(guó)海水養(yǎng)殖的特色產(chǎn)業(yè)，在快速發(fā)展的同時(shí)面臨著巨大的挑戰(zhàn)，如抗生素事件的發(fā)生及化學(xué)藥品使用不當(dāng)?shù)炔坏珜?duì)環(huán)境形成了潛在威脅，也影響了食品安全。健康可持續(xù)發(fā)展的養(yǎng)殖模式對(duì)于刺參養(yǎng)殖業(yè)而言是必要的途徑。養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)的提高對(duì)苗種數(shù)量和質(zhì)量提出了更高的要求;幼體成活率與附著率低等問(wèn)題成為制約苗種生產(chǎn)的主要因素，而育苗期間幼體餌料是關(guān)鍵。同時(shí)，稚/幼參的保苗周期長(zhǎng)，如何實(shí)現(xiàn)高效清潔生產(chǎn)也是苗種企業(yè)發(fā)展的瓶頸。本論文通過(guò)探討植物性餌料與動(dòng)物性

2、餌料對(duì)于刺參浮游幼體的生長(zhǎng)、生理與水質(zhì)等指標(biāo)的影響，以及生物絮團(tuán)技術(shù)在保苗中的應(yīng)用效果，旨在提供綠色育苗與保苗的理論依據(jù)，開(kāi)發(fā)相關(guān)的養(yǎng)殖技術(shù)。主要結(jié)果如下:
　　1.不同餌料對(duì)浮游幼體生長(zhǎng)生理、變態(tài)、成活及水質(zhì)的影響
　　利用植物性餌料（大型海藻磨碎液）和動(dòng)物性餌料（以海洋紅酵母為主）進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，設(shè)置Ⅰ組為大葉藻液（300目過(guò)濾）單獨(dú)投喂、Ⅱ組為海洋紅酵母單獨(dú)投喂、Ⅲ組為混合投喂（大葉藻液和海洋紅酵母各一半）。分別檢測(cè)了幼

3、體的生長(zhǎng)生理、變態(tài)、成活及水質(zhì)指標(biāo)。結(jié)果表明，①混合投喂比單獨(dú)投喂動(dòng)物性和植物性餌料生長(zhǎng)速度快，幼體提前24 h附著變態(tài);②小耳、中耳、大耳幼體的消化和免疫酶活力表明，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組蛋白酶、淀粉酶、超氧化物歧化酶3種酶活力隨幼體發(fā)育呈上升趨勢(shì)，其中Ⅱ、Ⅲ組大耳時(shí)期超氧化物歧化酶活力顯著高于Ⅰ組。Ⅰ和Ⅱ組過(guò)氧化氫酶活力也是升高趨勢(shì)，而Ⅲ組的變化不明顯。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組堿性磷酸酶活力大耳＞小耳＞中耳幼體，酸性磷酸酶活力整體無(wú)明顯規(guī)律，但是Ⅲ組大耳

4、幼體時(shí)期顯著高于其他組。③變態(tài)率以聚乙烯波紋板計(jì)數(shù)，48 h、72 h、15d后的稚參數(shù)量Ⅰ組都分別明顯小于Ⅱ和Ⅲ組。④Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組水體中氨氮和亞硝酸鹽從開(kāi)始到幼體附著期間濃度逐漸增高，Ⅰ組氨氮濃度最高，而Ⅲ組亞硝酸鹽濃度最高。以上結(jié)果表明，從消化酶活力指標(biāo)而言混合投喂有利于幼體的消化吸收，而免疫酶活力指標(biāo)顯示植物性餌料能夠促進(jìn)幼體免疫系統(tǒng)。幼體附著率和稚參成活率顯示混合投喂優(yōu)于植物性餌料優(yōu)于動(dòng)物性餌料。水體中氨氮濃度最高為動(dòng)物性餌料，

5、而亞硝酸鹽則為混合型餌料。各項(xiàng)指標(biāo)綜合考慮，混合投喂優(yōu)于植物性餌料，動(dòng)物性餌料投喂效果最低。
　　2.降解水體氨氮和亞硝酸鹽有益微生物的篩選與鑒定
　　通過(guò)對(duì)刺參圍堰養(yǎng)殖海域底泥環(huán)境中細(xì)菌的分離與篩選以及形態(tài)學(xué)鑒定。通過(guò)30℃、160 r/min搖床震蕩培養(yǎng)7d，每隔一天向其中加入5％的(NH4)2SO4溶液1 mL，篩選出降解氨氮和亞硝酸鹽的三株菌（編號(hào)為S721、S722、S729）;通過(guò)接入5％（約108 CFU/mL

6、）三株菌懸液于300 mL刺參保苗后期養(yǎng)殖水體中，在搖床中30℃培養(yǎng)10d，每隔2d測(cè)定水中的氨氮、亞硝酸鹽的含量，再次篩選出一株氨氮和亞硝酸鹽降解效率高的S729菌株。經(jīng)過(guò)16S rRNA測(cè)序，對(duì)比結(jié)果與枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）匹配程度為100％。通過(guò)檢測(cè)該菌株氨氮和亞硝酸鹽的降解效果發(fā)現(xiàn)，S729能夠?qū)⒊跏紳舛葹?.20 mg/L的氨氮濃度至第10天后降解為1.08 mg/L;將初始濃度為0.88 mg/L

7、的亞硝酸鹽濃度至第10天后降解為0.61 mg/L，第6天出現(xiàn)過(guò)最低值0.51 mg/L;結(jié)果表明，該菌株具高效降解養(yǎng)殖水體中氨氮和亞硝酸鹽效果。
　　3.添加S729菌株和適量碳源形成生物絮團(tuán)，對(duì)幼參生長(zhǎng)生理、成活及水質(zhì)的影響
　　以糖蜜為碳源，設(shè)計(jì)A為空白對(duì)照組、B為5％餌料重量的糖蜜和104 CFU/mL的芽孢桿菌（即S729）、C為10％餌料重量的糖蜜和104 CFU/mL的芽孢桿菌形成的生物絮團(tuán)進(jìn)行對(duì)比?？瞻讓?duì)照為

8、10天一輪倒池?fù)Q水循環(huán)保苗養(yǎng)殖，實(shí)驗(yàn)組時(shí)間為20天一輪倒池?fù)Q水保苗養(yǎng)殖。經(jīng)過(guò)為期60天的養(yǎng)殖，結(jié)果表明:①幼參的體重空白對(duì)照組體重較高、C組次之、B組較低;其特定生長(zhǎng)率(SGR)和餌料系數(shù)(FCR)A、C兩組均無(wú)明顯差異，B組較低;A、B、C三組存活率表明無(wú)明顯差異。②消化酶活力表明蛋白酶和脂肪酶均先減低后增加，而淀粉酶活力一直呈升高趨勢(shì);實(shí)驗(yàn)組的消化酶活力明顯高于空白對(duì)照組。③免疫酶活力表明過(guò)氧化氫酶、溶菌酶、酚氧化酶3中酶活力隨養(yǎng)殖

9、時(shí)間逐步增加，超氧化物歧化酶活力是先降低后增加;免疫酶活整體C組活力較高。④水體中的可培養(yǎng)細(xì)菌總數(shù)表明總菌隨著碳源和有益菌的使用逐漸升高，顯著高于空白對(duì)照組;各處理組中，水體中弧菌基本維持在104 CFU/mL水平，實(shí)驗(yàn)組的密度低于對(duì)照組;實(shí)驗(yàn)組中的芽孢桿菌隨著養(yǎng)殖過(guò)程而增加，高于空白對(duì)照組一個(gè)數(shù)量級(jí);⑤水體中氨氮和亞硝酸鹽在養(yǎng)殖過(guò)程B、C兩組一直低于空白對(duì)照組，COD略有偏高于空白對(duì)照組。以上結(jié)果表明利用生物絮團(tuán)技術(shù)進(jìn)行刺參保苗能夠延