中藥雞爪蓮對HIV新靶點的作用及其有效成分的研究.pdf

1、艾滋病(Acquiredimmunedeficiencysyndrome，AIDS)是由人免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirus，HIV)引起的傳染病，自從1981年第一例病例報道以來，全世界已有超過7000萬的人口感染了該種病毒，其中超過三分之一死于該種疾病。 目前已獲準上市的HIV感染治療藥物主要以病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶和蛋白酶為靶點，具有易產(chǎn)生耐藥性、毒副作用強以及價格貴的缺點。因此目前臨床上主要采用高

2、效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART療法)，該療法是由兩個逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和一個蛋白酶抑制劑所組成，雖然這兩類制劑能抑制病毒復(fù)制，延緩發(fā)病，延長生命，但并不能消除病毒，毒副作用也較大，長期使用仍然易產(chǎn)生耐藥性，需要不斷換藥，且治療價格貴，難以滿足治療的需要。所以，基于上述兩個靶點藥物及其合并使用的缺點，尋找作用于HIV新靶點的藥物就具有特別重要的意義。 本研究先以體外藥效學(xué)的檢測手段確證了中藥雞爪蓮的活性提取物，繼而以BIA(Biomo

3、lecularInteractionAnalysis)技術(shù)對樣品結(jié)合HIVgp41的檢測結(jié)果為指導(dǎo)，對目標的天然產(chǎn)物雞爪蓮進行了活性追蹤分離，有針對性地從天然產(chǎn)物雞爪蓮中提取、分離和純化有效成分，并通過波譜學(xué)的手段對有效單體化合物的結(jié)構(gòu)進行了初步鑒定。藥物提取和分離部分的主要實驗方法包括薄層層析(Thin-LayerChromatography，TLC)、高效液相色譜(HighPerformanceLiquidChromatograph

4、y，HPLC)技術(shù)和柱層析(ColumnChromatography)，藥效學(xué)檢測的方法主要包括BIA結(jié)合靶蛋白的檢測技術(shù)及體外細胞培養(yǎng)的生物活性檢測，其中細胞培養(yǎng)使用的細胞株為MT-4細胞，病毒株為HIV-1ⅢB。通過實驗得出結(jié)論：雞爪蓮的水提取物在MT-4細胞中比不同濃度的乙醇提取物抗HIV-1作用更好；進一步分離得到的粗提物A1和B1經(jīng)BIA技術(shù)檢測均與HIV-1的跨膜蛋白gp41有較好的結(jié)合；粗提物A1在經(jīng)進一步純化處理后得到的