尿激酶型纖溶酶原激活物在人肺癌細胞中表達調(diào)控的研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文y76S914學(xué)棱代碼：10246學(xué)號：0091018尿激酶型纖溶酶原激活物在人肺癌細胞中表達調(diào)控的研究院系(所)：專業(yè)：姓名：導(dǎo)師：導(dǎo)孵組成燙：完成日期：上海醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分予生物學(xué)堂暢朱運松教授寒后燕教授馬端教授2005年4月博上學(xué)位論文尿激酶型纖溶酶原激活物在人肺癌細胞中表達調(diào)控的研究摘要尿激酶型纖溶酶原激活物在人肺癌細胞中表達調(diào)控的研究捅要轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤患者死亡的主要原因，腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移是個多步驟、多階段有

2、序的復(fù)雜過程，它涉及細胞粘附、移動以及細胞基質(zhì)的降解和重塑的復(fù)雜過程，一系列的蛋白水解酶如纖溶酶、基質(zhì)金屬蛋白酶、組織蛋白酶等參與此過程，其中尿激酶型纖溶酶原激活劑(uPA)在這一過程中發(fā)揮重要的作用。uPA是一種絲氨酸蛋白水解酶，新合成的uPA是分子量約54kD的單鏈酶原，uPA與腫瘤細胞表面的受體(uPAR)結(jié)合，使uPA濃集于細胞表面，活性形式的uPA其絲氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域可水解激活纖溶酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w溶酶，纖溶酶可直接降解基質(zhì)組分或進

3、一步激活金屬蛋白酶降解基質(zhì)，從而促進腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移。uPA與uPAR結(jié)合后還可介導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用，引起細胞內(nèi)一系列與細胞增殖、細胞遷移以及新生血管形成相關(guān)的基因表達，有利于腫瘤細胞的侵襲。大量的臨床研究表明，在高侵襲性的惡性腫瘤中，uPA的表達都明顯升高，與患者的預(yù)后不良明顯相關(guān)。盡管在轉(zhuǎn)錄后和蛋白質(zhì)水平的調(diào)節(jié)也起著一定的作用，但大量的文獻報道uPA基因表達的調(diào)節(jié)主要在轉(zhuǎn)錄水平。因此，研究uPA在轉(zhuǎn)錄水平的表達調(diào)控機制對于抑制細胞間基

4、質(zhì)的水解從而抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移很重要。目前uPA的啟動子已克隆測序，研究表明，uPA啟動子位于轉(zhuǎn)錄起始位點上游1980bp處有一含有兩個APl位點的增強子序列，它在調(diào)節(jié)uPA啟動子活性中起主要作用。在兩個API位點之間有一74bp的增強子協(xié)調(diào)區(qū)(COM)，文獻報導(dǎo)在COM區(qū)可分為兩部分，即上游的uCOM區(qū)，其序列為caatcagcatgacagcct，和下游的dCOM區(qū)，序列為atctggagtcatgagagct，EMSA的結(jié)果顯示在uC

5、OM區(qū)分別有四個反式因子與其結(jié)合，分別為UEFl、UEF2、UEF3和UEF4，在dCOM區(qū)有兩個反式調(diào)節(jié)因子與其結(jié)合，分別為UEFl和UEF2，這些反式因子與COM區(qū)結(jié)合后協(xié)調(diào)APl位點的主要反式轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮增強子的活性，目前UEF2、UEF3和UEF4的cDNA已先后被克隆，其表達產(chǎn)物已被純化獲得，它們協(xié)調(diào)APl對uPA增強子的調(diào)節(jié)功能已基本明確。而在uCOM區(qū)和dCOM區(qū)都發(fā)揮作用的UEFl至今仍未被克隆和鑒定。對COM區(qū)UEFl