大鼠小腸缺血再灌注損傷中細(xì)胞凋亡與增殖動(dòng)態(tài)變化及葛根素干預(yù)研究.pdf

1、目的：探討小腸缺血再灌注后不同時(shí)限小腸粘膜細(xì)胞凋亡與增殖發(fā)生發(fā)展的動(dòng)態(tài)變化，同時(shí)觀察葛根素干預(yù)后對(duì)缺血再灌注損傷的影響。 方法：選用健康雄性SD大鼠，建立小腸缺血再灌注損傷模型，分為缺血再灌注組與缺血再灌注葛根素干預(yù)組。每組大鼠根據(jù)缺血再灌注后不同時(shí)限，分為對(duì)照、缺血再灌注后0'、30'、1h、2h、3h、6h、12h、24h、48h、72h、96h共12組(每組6只)。在缺血再灌注后不同時(shí)間點(diǎn)，采用HE染色觀察小腸粘膜組織學(xué)切

2、片，TUNEL染色、透射電鏡檢測(cè)小腸粘膜凋亡細(xì)胞，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)熱休克蛋白70(HSP70)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)，對(duì)小腸粘膜組織病理學(xué)、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞增殖的變化進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察。 結(jié)果：1.大鼠小腸歷經(jīng)熱缺血40分鐘后，再灌注0～96h大致經(jīng)歷了潛伏期、急性期、交錯(cuò)期、恢復(fù)期4個(gè)階段的形態(tài)變化。缺血再灌注后，出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡及組織學(xué)病理改變，開(kāi)始于潛伏期，加重于急性期。 2

3、.與對(duì)照組相比，HSP70在缺血再灌注組及葛根素干預(yù)組均表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05)；在缺血再灌注葛根素干預(yù)組表達(dá)強(qiáng)度則明顯強(qiáng)于單純?nèi)毖俟嘧⒔M，在同一時(shí)間點(diǎn)上二組比較差異具有顯著性意義(P＜0.05)。 3.與對(duì)照組相比，VEGF在缺血再灌注組及葛根素干預(yù)組小腸粘膜基底層處的血管和毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞中均有表達(dá)(P＜0.05)；在葛根素干預(yù)組VEGF的表達(dá)較單純?nèi)毖俟嘧⒔M弱，在同一時(shí)間點(diǎn)上二組比較差異具有顯著性意義(P＜0.05)。

4、 4.與對(duì)照組相比，PCNA在缺血再灌注組及葛根素干預(yù)組均表達(dá)增強(qiáng)1(P＜0.05)；葛根素干預(yù)組PCNA的表達(dá)在小腸缺血再灌注后0'～3h明顯高于缺血再灌注組，6～48h明顯低于缺血再灌注組，在同一時(shí)間點(diǎn)上二組比較差異具有顯著性意義(P＜0.05)。 5.葛根素干預(yù)后對(duì)大鼠小腸缺血再灌注后損傷的影響：潛伏期長(zhǎng)，急性期短，迅速進(jìn)入恢復(fù)期。各期小腸粘膜組織學(xué)病理改變減輕，細(xì)胞凋亡數(shù)明顯減少，HSP70表達(dá)增加，VEGF表達(dá)

5、減少。PCNA在潛伏期、急性期表達(dá)明顯增加。 結(jié)論：1.小腸在短時(shí)間缺血后、再灌注可出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡及組織學(xué)病理改變。大多數(shù)小腸粘膜細(xì)胞經(jīng)歷短暫的凋亡前期反應(yīng)后則進(jìn)入恢復(fù)階段，最終結(jié)果是小腸粘膜結(jié)構(gòu)和功能的修復(fù)。 2.HSP70、VEGF、PCNA參與了小腸缺血再灌注損傷的病理生理過(guò)程，可作為動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)機(jī)體缺血再灌注損傷中細(xì)胞凋亡與增殖的有效指標(biāo)。 3.葛根素對(duì)大鼠小腸缺血再灌注所致的腸粘膜損傷具有保護(hù)作用，其作