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文檔簡介
1、目的:探討模擬缺血再灌注(imitativeischemia-reperfusion,IIR)引起神經(jīng)元凋亡的途徑和褪黑素(melatonin,MT)抗凋亡的作用機(jī)理。 方法:(1)建立原代培養(yǎng)大鼠小腦顆粒細(xì)胞的體外模擬缺血(OxygenGlucoseDeprivation,OGD)再灌注模型; (2)利用HOech33258細(xì)胞染色以及測定培養(yǎng)液LDH活性,觀察OGD后再灌注對細(xì)胞的損傷情況; (3)細(xì)胞DNA
2、瓊脂糖凝膠電泳,觀察OGD后再灌注后細(xì)胞的損傷情況; (4)利用Rhodamine123和激光共聚焦顯微鏡觀察線粒體膜電位的變化; (5)ELISA檢測細(xì)胞漿中細(xì)胞色素C水平。 (6)并用上述指標(biāo)觀察MT對其損傷的保護(hù)作用。 結(jié)果:(1)在體外模擬缺血再灌注細(xì)胞模型中,HOech33258染色細(xì)胞明顯出現(xiàn)部分神經(jīng)原腫脹和壞死,MT可減輕細(xì)胞的腫脹和壞死; (2)OGD后再灌注培養(yǎng)液中LDH活性增加
3、(P<0.05),加MT對LDH釋放有明顯的抑制作用 (3)OGD后再灌注瓊脂糖凝膠電泳DNA出現(xiàn)梯狀條帶,MT組中DNA梯狀條帶消失; (4)OGD后再灌注線粒體膜電位明顯降低,MT明顯抑制了線粒體膜電位的降低; (5)OGD后再灌注細(xì)胞漿中細(xì)胞色素C含量增加(P<0.05),MT對其有明顯的抑制作用。 結(jié)論:(1)缺血再灌注引起的神經(jīng)元凋亡機(jī)理之一是通過線粒體凋亡途徑; (2)MT可通過阻止線
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