褪黑素對缺血再灌注所致神經(jīng)元凋亡的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：探討模擬缺血再灌注(imitativeischemia-reperfusion，IIR)引起神經(jīng)元凋亡的途徑和褪黑素(melatonin，MT)抗凋亡的作用機(jī)理。 方法：(1)建立原代培養(yǎng)大鼠小腦顆粒細(xì)胞的體外模擬缺血(OxygenGlucoseDeprivation，OGD)再灌注模型； (2)利用HOech33258細(xì)胞染色以及測定培養(yǎng)液LDH活性，觀察OGD后再灌注對細(xì)胞的損傷情況； (3)細(xì)胞DNA

2、瓊脂糖凝膠電泳，觀察OGD后再灌注后細(xì)胞的損傷情況； (4)利用Rhodamine123和激光共聚焦顯微鏡觀察線粒體膜電位的變化； (5)ELISA檢測細(xì)胞漿中細(xì)胞色素C水平。 (6)并用上述指標(biāo)觀察MT對其損傷的保護(hù)作用。 結(jié)果：(1)在體外模擬缺血再灌注細(xì)胞模型中，HOech33258染色細(xì)胞明顯出現(xiàn)部分神經(jīng)原腫脹和壞死，MT可減輕細(xì)胞的腫脹和壞死； (2)OGD后再灌注培養(yǎng)液中LDH活性增加

3、(P＜0.05)，加MT對LDH釋放有明顯的抑制作用 (3)OGD后再灌注瓊脂糖凝膠電泳DNA出現(xiàn)梯狀條帶，MT組中DNA梯狀條帶消失； (4)OGD后再灌注線粒體膜電位明顯降低，MT明顯抑制了線粒體膜電位的降低； (5)OGD后再灌注細(xì)胞漿中細(xì)胞色素C含量增加(P＜0.05)，MT對其有明顯的抑制作用。 結(jié)論：(1)缺血再灌注引起的神經(jīng)元凋亡機(jī)理之一是通過線粒體凋亡途徑； (2)MT可通過阻止線