黃花胡椒化學(xué)成分和藥理活性研究.pdf

1、隨著社會發(fā)展速度的加快和人們精神生活受到方方面面的壓力，抑郁癥的發(fā)病率逐年提高，其本質(zhì)就是一種常見的情感障礙性精神疾病，同時也是目前全世界最易致殘的疾病之一。因此從天然產(chǎn)物中尋找有效、優(yōu)效甚至高效，低毒便于應(yīng)用于臨床的結(jié)構(gòu)新穎的化合物尤為必要。黃花胡椒Piperflaviflorum C.DC.系胡椒科(Piperaceae)胡椒屬(Piper)攀援藤本植物。性熱、味辣，入風(fēng)、火塔，有溫通氣血，散寒止痛，止癢之功效;主治:“接崩短嘎”（

2、脘腹脹痛），“納勒接短”（痛經(jīng)），“攏習(xí)哈習(xí)毫”（癬）。生物堿是胡椒屬中的一大類成分，具有抗抑郁、抗炎活性，而黃花胡椒的成分和藥理活性研究極度匱乏，鑒于此，對黃花胡椒進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分分離工作和藥理活性的篩選顯得尤為重要。這不僅豐富了胡椒屬藥用植物的臨床應(yīng)用;同時對新穎的，活性強的，機理獨特的天然產(chǎn)物進(jìn)行更加合理的開發(fā)和利用;更廣泛地說，可以對我國少數(shù)民族藥用植物（藏、蒙、維、傣）的開發(fā)利用提供堅實的基礎(chǔ)。
　　 故本課題主要著

3、眼于其化學(xué)成分和藥理活性研究:
　　 一、化學(xué)成分研究
　　 1、化學(xué)成分分離和結(jié)構(gòu)鑒定
　　 對黃花胡椒地上部位的乙醇提取物進(jìn)行系統(tǒng)溶劑的萃取，分為石油醚(PEF)、二氯甲烷(DF)、乙酸乙酯(AF)、正丁醇(BF)、水(WF)五個部位。采用正相、反相柱層析、制備中壓、制備薄層、半制備液相等各種提取分離技術(shù)，從DF部位中共分出30種化學(xué)成分，鑒定了24種;從AF部位中共分出28種化學(xué)成分，鑒定了22種化學(xué)成分;

4、從BF部位中共分出6種化學(xué)成分，鑒定了2種。去重后共鑒定了42種化學(xué)成分，其中包含3個新化合物（包括2個生物堿和1個酚苷），1個新的天然產(chǎn)物（苯丙素苷類）。23個化合物為屬首分，40個化合物為種首分。所分離的化合物的結(jié)構(gòu)類型主要有生物堿類，黃酮及黃酮苷類，苯丙素及其苷類,嘌呤及其苷類，咪唑類和呋喃類，小分子酚酸及其苷類，甾醇及植物醇等等。
　　 2、總生物堿的制備、含量測定和定性分析
　　 采用酸提堿沉法從黃花胡椒的乙醇

5、提取物中提取出總生物堿，酸性染料比色法測定總生物堿含量為56.4％，其中單體胡椒堿含量為52.8％;HPLC-DAD定性分析胡椒堿單體的存在，HPLC-ESI-MS定性分析除胡椒內(nèi)酰胺A、胡椒內(nèi)酰胺B和頭花千金藤酮B三種生物堿類成分外其余11種生物堿存在的可能。
　　 二、主要藥效學(xué)研究
　　 采用經(jīng)典的小鼠強迫游泳模型(FST)對黃花胡椒總部位(TF)，總生物堿(TA)以及胡椒堿(piperine)進(jìn)行抗抑郁實驗，采用

6、高中低三個劑量組分別考察不同劑量下總堿及最大量單體胡椒堿對小鼠游泳不動時間的影響,結(jié)果顯示總部位的高劑量、總生物堿(TA)的高劑量以及胡椒堿(piperine)單體化合物的高劑量顯著延長小鼠游泳不動時間，顯示出初步的體內(nèi)抗抑郁的活性，同時總生物堿的活性較胡椒堿的活性沒有顯著性差異，提示胡椒堿為黃花胡椒藥材抗抑郁的主要活性成分。同時對小鼠腦中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)(5-HT、DA、NE)進(jìn)行了提取和含量測定，結(jié)果表明5-HT的含量較空白組有明顯

7、的提升，而DA和NE的含量沒有明顯的提升，表明起作用的活性成分主要是通過提高腦內(nèi)單胺類遞質(zhì)5-HT的含量來產(chǎn)生抗抑郁作用。
　　 三、一般藥理活性篩選
　　 1、抗炎
　　 采用脂多糖LPS刺激RAW264.7細(xì)胞株模型對分得的兩個新的生物堿flavifloramide A和flavifloramide B進(jìn)行了的體外NO生成抑制實驗，以吲哚美辛為陽性對照藥，初步評價這兩個新的生物堿的抗炎活性，結(jié)果顯示兩個新的生

8、物堿并沒有顯示出顯著的體外抗炎活性。采用二甲苯致小鼠耳腫脹經(jīng)典模型，考察黃花胡椒總乙醇提取部位(TF)和胡椒堿單體(piperine)的抗炎活性，結(jié)果顯示TF高低劑量組顯示顯著的抗炎活性，而單體胡椒堿沒有顯示出明顯的體內(nèi)抗炎活性。
　　 2、抗腫瘤
　　 采用四種腫瘤細(xì)胞株:A-549（人類肺癌細(xì)胞），HCT116（人結(jié)腸癌細(xì)胞），MDA-MB-231（人乳腺癌細(xì)胞），CCRF-CEM（人急性淋巴細(xì)胞白血病T淋巴細(xì)胞）對