鉤體病小鼠非致死性感染模型及診斷相關研究.pdf

1、鉤體病是致病性鉤體引起的嚴重人獸共患病，我國是主要流行區(qū)之一。人通過直接或間接接觸感染動物尿液而感染。典型鉤體病感染者除發(fā)熱、黃疸外，可出現(xiàn)皮膚和臟器廣泛出血。急性患者常因彌漫性肺出血而死亡。故鉤體病的早期診斷，對有效治療和控制流行十分重要。 野生鼠由于帶菌率高，帶菌時間長，是鉤體病的主要傳染源。在前期研究中，我們建立了小鼠持續(xù)性感染模型，該模型與常用的金黃地鼠及豚鼠急性致死性感染模型相互補。通過檢測小鼠血清中特異性免疫應答水平

2、，并結合免疫病理學，初步探討了小鼠感染鉤體后免疫應答的動態(tài)變化，及其與病理學之間的相關聯(lián)系。 在建立的小鼠肺出血型鉤體病感染模型中我們發(fā)現(xiàn)，與豚鼠等敏感動物感染鉤體后急性致死性感染不同，在感染第4天，第16天的小鼠病理解剖及組織病理學檢查可見明顯病變表現(xiàn)，但無一例小鼠死亡。自感染第28天的小鼠肝臟組織及感染第42天的小鼠腎臟組織中仍可培養(yǎng)出鉤體，證實其為慢性帶菌狀態(tài)。故小鼠應可作為鉤體病慢性感染及帶菌者模型。此外，根據(jù)其感染后體

3、液免疫與細胞免疫水平變化規(guī)律，我們在早期一定階段再次攻擊感染，期望建立急性鉤體病感染模型。結果顯示，與正常感染組相比，再感染組表現(xiàn)出較嚴重的腎臟病變。 鉤體外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)作為主要的外膜抗原，可以刺激機體產(chǎn)生抗體。我們已從致病性問號鉤體賴株的全基因組數(shù)據(jù)庫中數(shù)百種預測的外膜蛋白基因中挑選了一部分進行克隆表達。研究證實其核苷酸及蛋白質(zhì)序列在15株致病性鉤體中高度保守。通過免疫印跡技術

4、我們初步驗證了重組外膜蛋白如LipL21、LipL32、OmpL1、LipL41、Qlp42等的抗原性。通過免疫新西蘭兔制備了多克隆血清，初步驗證了其免疫反應性。前期試驗結果顯示，重組LipL32和OmpL1作為包被抗原與已知鉤體病患者血清反應，具有較強的特異性和敏感性。 臨床上急慢性期鉤體病患者血清不易取得且樣本標準化難度高。我們的前期研究通過小鼠血清中特異性免疫應答水平結合病理學表現(xiàn)，制備出不同感染階段的標準鼠血清，已用于上