激活腦星形膠質(zhì)細(xì)胞保護(hù)神經(jīng)元的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文激活腦星形膠質(zhì)細(xì)胞保護(hù)神經(jīng)元的實(shí)驗(yàn)研究姓名：徐江華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：梅元武20080524華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文2中文摘要中文摘要在腦缺血的研究中發(fā)現(xiàn)，局灶性腦缺血能激活局部AS使其活性增強(qiáng)并產(chǎn)生神經(jīng)生長(zhǎng)因子發(fā)揮腦保護(hù)作用，若其它無(wú)缺血部位AS也能激活產(chǎn)生神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，將更有效的保護(hù)缺血半暗帶的神經(jīng)元。本實(shí)驗(yàn)探討藥物激活正常AS保護(hù)神經(jīng)元。目的：目的：離體培養(yǎng)AS

2、，觀察藥物能否激活A(yù)S；明確藥物對(duì)AS內(nèi)皮素受體B表達(dá)有何影響。方法：方法：1出生48小時(shí)內(nèi)的健康SD大鼠，分離大腦皮層并進(jìn)行AS體外培養(yǎng)。原代細(xì)胞經(jīng)純化后純度達(dá)到95%以上者用于實(shí)驗(yàn)。2細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)初篩藥物對(duì)AS的安全濃度。取經(jīng)3次傳代培養(yǎng)的大鼠乳鼠AS，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。對(duì)照組加入相同體積的培養(yǎng)基，各實(shí)驗(yàn)組中分別加入不同濃度藥物，MTT比色法對(duì)AS進(jìn)行藥物毒性分析。根據(jù)分析結(jié)果確定本實(shí)驗(yàn)的安全藥物濃度。3流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞增殖

3、激活情況。將AS隨機(jī)分為對(duì)照組和藥物組。對(duì)照組加入相同體積的培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組分別在細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)后加入不同濃度藥物，加入藥物后繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)。流式細(xì)胞儀測(cè)細(xì)胞周期，結(jié)合增殖指數(shù)（PrI值）了解AS的增殖激活情況。4熒光免疫法測(cè)定藥物對(duì)內(nèi)皮素受體B表達(dá)的影響。將AS隨機(jī)分為對(duì)照組和藥物組。對(duì)照組加入相同體積的培養(yǎng)基，藥物組加入不同濃度藥物作用24小時(shí)后固定細(xì)胞爬片，封閉并加入內(nèi)皮素受體B抗體過夜，加熒光二抗，最后PI