桑黃抗腫瘤活性物質(zhì)的提取及活性檢測.pdf

1、“桑黃”為擔(dān)子菌亞門（Basidiomycotina），層菌綱（Hymenomycetes），多孔菌目（Polyporales），銹革孔菌科（Hymenochaetacae），針層孔菌屬（Phellinus）的真菌，東亞的國家中已經(jīng)被當(dāng)作一種傳統(tǒng)的藥使用，用于治療胃腸混亂，降火和淋巴的疾病。特別是它的抗腫瘤活性，桑黃也有許多優(yōu)勢作為抗癌候選藥之一，被人們所關(guān)注。
　　 1.桑黃多糖的分離純化及活性研究
　　 本部分，以桑

2、黃Phellinus baumii為研究對象，從烘干菌絲體中通過水溶醇提法得到粗多糖，進(jìn)一步經(jīng)過DEAE-Sephadex A-50，以及Sephadex G-75柱層析得到一活性峰（PB），進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，該多糖分子量約為17kDa。這是一種新的活性多糖。
　　 以PB為對象進(jìn)行活性研究，體外活性檢測發(fā)現(xiàn)，PB能有效刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞、小鼠脾細(xì)胞以及小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7增殖。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，PB能顯著提高RAW26

3、4.7細(xì)胞NO的釋放量，同時(shí)能顯著增加IL-1β，IL-18，IL-12p35和IL-12p40基因的表達(dá)水平，并且具有濃度依賴性。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，PB對人肝癌細(xì)胞株HepG-2、人腸癌細(xì)胞株HCT-8細(xì)胞發(fā)揮直接的抑制作用，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，PB是通過阻斷HepG-2細(xì)胞周期的S期來達(dá)到抑制生長的作用的，同時(shí)，在高濃度長時(shí)間作用下，PB還能誘導(dǎo)HepG-2細(xì)胞發(fā)生凋亡現(xiàn)象。
　　 因此，從桑黃Phellinus baumii菌絲體

4、中提取的新的活性多糖（PB）同時(shí)具有廣泛的免疫增強(qiáng)活性及直接的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的活性。這些結(jié)果同時(shí)也說明，桑黃菌絲體多糖同樣具有與子實(shí)體多糖相似的生物活性。而桑黃菌絲體生長周期短，產(chǎn)量高，因此，本部分為桑黃的進(jìn)一步研究應(yīng)用提供了新的途徑。
　　 2.桑黃菌絲體乙醇粗提物活性的研究
　　 除了活性多糖外，桑黃還含有多種活性成分，如黃酮等。本部分，以桑黃烘干菌絲體為研究對象，通過乙醇提取法提取桑黃有效成分，對乙醇粗提物進(jìn)行初

5、步的研究。研究發(fā)現(xiàn)，桑黃菌絲體乙醇提取物含有少量的黃酮類物質(zhì)。同時(shí)體外活性檢測發(fā)現(xiàn)，該乙醇提取物能顯著抑制HepG-2細(xì)胞的增殖。該乙醇粗提物處理HepG-2細(xì)胞后，其細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)明顯的變化，細(xì)胞變圓、皺縮，體積變??；經(jīng)過annexin V-FITC/PI雙染流式細(xì)胞儀檢測，證明HepG-2細(xì)胞發(fā)生了凋亡；
　　 研究還發(fā)現(xiàn)，桑黃乙醇粗提物處理HepG-2細(xì)胞后，隨著藥物濃度和作用時(shí)間的增加，凋亡抑制基因BCL-2 mRNA的表