缺血預處理、后處理以及遠端肢體預處理對離體大鼠心肌保護作用研究.pdf

1、第一部分藥物后處理和或酸性緩沖液后處理對離體大鼠心肌保護作用研究
　　 目的:
　　 缺血后處理已經(jīng)證實具有心臟保護作用,并與線粒體膜通透性轉換孔狀態(tài)有關。同時還有研究發(fā)現(xiàn)在再灌注開始短暫的酸性緩沖液灌注也具有心肌保護作用,其機制可能與線粒體膜通道轉換孔狀態(tài)有關。本研究通過心肌停搏液停搏的離體大鼠心臟模型,評價線粒體膜通透性轉換孔開放阻斷劑環(huán)孢素A(cyclosporine A,CsA),酸性緩沖液或者含有環(huán)孢素的酸性緩

2、沖液是否具有與經(jīng)典缺血后處理相同的心肌保護作用。環(huán)孢素A后處理以及酸性緩沖液后處理心肌保護機制是否與抑制線粒體膜通透性轉換孔開放有關。
　　 方法:
　　 取SD大鼠心臟,建立離體langendorff心肌缺血再灌注模型,隨機分五組(每組12只)。對照組(Con組):經(jīng)歷平衡期20分鐘,灌注停跳液后室溫模擬缺血30分鐘,再灌注60分鐘。缺血后處理組(Ipo組):再灌注開始時給予10秒再灌注,10秒阻斷,共六個循環(huán)。環(huán)孢素

3、A后處理組(CsA組):再灌注開始5分鐘給予含有環(huán)孢素A(0.8μ mol/L)Krebs—Henseleit緩沖液灌注。酸性緩沖液后處理組(Low pH組):再灌注開始3分鐘給予酸性:Krebs-Henseleit緩沖液灌注(pH:6.8)。酸性緩沖液聯(lián)合環(huán)孢素A后處理(Low pH+CsA組):再灌注開始3分鐘給予含有0.2μ mol/L環(huán)孢素A的酸性Krebs—Henseleit緩沖液灌注(pH:6.8)。檢測各組平衡期,再灌注5

4、、15、30、60分鐘血流動力學指標；Western blot法檢測胞漿細胞色素C含量；線粒體腫脹液檢測線粒體膜通透性轉換孔對Ca2+敏感度；TUNEL法檢測心肌細胞凋亡。
　　 結果:
　　 記錄平衡期,再灌注5,15,30和60分鐘,左室發(fā)展壓,±dp/dtmax,心率,冠狀動脈流量。五組在平衡期無差異。左室發(fā)展壓:CsA組再灌注5,15,30分鐘時,明顯優(yōu)于Con組；Low pH組再灌注15,30和60分鐘時,明顯

5、優(yōu)于Con組；Low pH+CsA組再灌注5,15分鐘時,明顯優(yōu)于Con組；Ipo組再灌注期的LVDP較Con組未見明顯差別。+dp/dtmax:CsA組再灌注5.15和30分鐘時,明顯優(yōu)于Con組；Ipo組再灌注60分鐘時,明顯優(yōu)于Con組；Low pH組再灌注30,60分鐘時,明顯優(yōu)于Con組；Low pH+CsA組再灌注5,60分鐘時,明顯優(yōu)于Con組。-dp/dtmax:CsA組再灌注5,15,30和60分鐘時,明顯優(yōu)于Con組

6、；Ipo組再灌注60分鐘時,明顯優(yōu)于Con組；Low pH組再灌注15和30分鐘時,明顯優(yōu)于Con組；Low pH+CsA組再灌注5,15,30和60分鐘時,明顯優(yōu)于Con組。心率:Low pH+CsA組再灌注5分鐘時,明顯優(yōu)于Con組,其余各組心率與Con無明顯差別。再灌注期間各組冠脈流量較平衡期明顯減少,各時間點組間比較,均無顯著差異。Ipo組,CsA組,Low pH組和Low pH+CsA組的胞漿細胞色素C釋放,較Con組明顯減少

7、。平衡期各組線粒體對Ca2+誘導的通透性轉換孔開放敏感度無明顯差別；再灌注5分鐘線,Ipo組,CsA組,Low pH組和:LowpH+CsA組線粒體對Ca2+誘導的通透性轉換孔開放敏感度較Con明顯降低。Ipo組,CsA組,Low pH組和Low pH+CsA組的心肌細胞凋亡率(1.38±0.41,1.10±0.22,1.50±0.50,1.60±0.89,每1000個細胞)明顯低于Con組(3.60±0.89,每1000個細胞),(p

8、＜0.05)。
　　 結論:
　　 本研究顯示經(jīng)典缺血后處理,環(huán)孢素A后處理,酸性緩沖液后處理或聯(lián)合環(huán)孢素A后處理能夠減輕再灌注損傷引起的線粒體膜通透性轉換孔開放增加所導致的細胞色素C釋放,降低線粒體膜通透性轉換孔對Ca2+敏感性,進而減少心肌細胞凋亡,環(huán)孢素A后處理,酸性緩沖液后處理或聯(lián)合環(huán)孢素A后處理同時可以改善心臟血流動力學狀況,可以達到與經(jīng)典后處理相同的心肌保護作用,此外酸性緩沖液后處理與環(huán)孢素A后處理聯(lián)合應用并