大蒜種質(zhì)資源的形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)、愈傷誘導(dǎo)再生和原生質(zhì)體培養(yǎng).pdf

1、本試驗(yàn)收集了來(lái)自中國(guó)、韓國(guó)和歐洲的71個(gè)大蒜品種，于2007年10月份種植在浙江大學(xué)華家池校區(qū)實(shí)驗(yàn)農(nóng)場(chǎng)試驗(yàn)田。通過(guò)對(duì)所選大蒜形態(tài)學(xué)性狀的數(shù)值進(jìn)行系統(tǒng)聚類(lèi)分析，結(jié)果表明蒜頭重、播種至出苗所需天數(shù)及抽薹時(shí)間是影響其分類(lèi)的重要指標(biāo)。根據(jù)這些性狀可將試驗(yàn)品種分為四類(lèi)，歐洲品種和韓國(guó)品種與中國(guó)品種有較密切聯(lián)系。研究結(jié)果將為大蒜品種的親緣關(guān)系鑒定提供依據(jù)，也為進(jìn)一步的品種演進(jìn)研究和育種工作提供參考。 以陜西“蔡家坡”大蒜為材料，分別用其鱗莖

2、盤(pán)、莖尖、營(yíng)養(yǎng)體為外植體，在含有不同6-BA和2,4-D濃度配比的MS或B5培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)形成的試驗(yàn)，篩選誘導(dǎo)大蒜愈傷組織形成的最佳培養(yǎng)基，然后將誘導(dǎo)的愈傷組織繼代在含6-BA、2,4-D及NAA不同濃度組合的MS或B5培養(yǎng)基上，篩選愈傷增殖最快的培養(yǎng)基。再用繼代后的愈傷組織建立胚性懸浮細(xì)胞系，探索大蒜胚性懸浮細(xì)胞系建立的最佳條件；最后將愈傷及懸浮細(xì)胞置于含不同6-BA、2,4-D及NAA濃度配比的MS培養(yǎng)基上，記錄愈傷的分化

3、率和愈傷分化的芽數(shù)及根數(shù)，篩選大蒜植株再生的最佳激素組合。試驗(yàn)結(jié)果表明：2,4-D在大蒜愈傷組織誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)中起關(guān)鍵作用，0.1mgl-1 6-BA+1.0或2.0 mgl-1 2,4-D培養(yǎng)基誘導(dǎo)大蒜莖盤(pán)愈傷效果最佳；1.0mgl-1 2,4-D適宜于愈傷增殖及保持。在MS+0.1mgl-1 6-BA+1.0 mgl-1 NAA培養(yǎng)基上，淡黃色致密顆粒愈傷的芽分化能力最強(qiáng)，每塊愈傷平均分化8.4個(gè)芽；同時(shí)氣生根的分化能力也較強(qiáng)，每塊

4、愈傷平均生根6.4條，其懸浮細(xì)胞再生效果更佳。將生根苗移栽于大田中，15d后成活率達(dá)到80％。本研究初步建立了一套大蒜離體快繁的體系。 本試驗(yàn)還對(duì)大蒜原生質(zhì)體培養(yǎng)進(jìn)行了初步研究。分別用大蒜愈傷、幼葉及胚性懸浮細(xì)胞為材料，進(jìn)行預(yù)備試驗(yàn)篩選最佳原生質(zhì)體的來(lái)源材料。將胚性懸浮細(xì)胞放入0.4mol 1-1、0.5 mol 1-1、0.6mol 1-1及0.7 mol 1-1甘露醇溶液中進(jìn)行質(zhì)壁分離試驗(yàn)，確定滲透壓穩(wěn)定劑的種類(lèi)及最佳濃度；

5、用不同酶液提取懸浮細(xì)胞的原生質(zhì)體，每隔一段時(shí)間測(cè)定原生質(zhì)體產(chǎn)量和活力，確定原生質(zhì)體分離的最佳酶液組合及酶解時(shí)間；采用固液結(jié)合培養(yǎng)法在1/2 MS及B5培養(yǎng)基上培養(yǎng)。試驗(yàn)結(jié)果表明大蒜胚性懸浮細(xì)胞是原生質(zhì)體分離的適宜材料，0.5 mol 1-1甘露醇是最合適的滲透壓穩(wěn)定濃度，最佳大蒜懸浮細(xì)胞原生質(zhì)體提取的酶液組合為2％纖維素酶(R-10)+0.2％果膠酶(Y-23)，酶解6h。目前為止培養(yǎng)的原生質(zhì)體還沒(méi)有形成愈傷組織，有關(guān)培養(yǎng)進(jìn)程仍在觀察中