電針結(jié)合重復(fù)經(jīng)顱磁刺激對腦缺血大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞激活和海馬突觸可塑性的研究.pdf

1、腦梗死是常見的腦血管疾病，嚴(yán)重危害我國中、老年人身體健康。腦梗死所致功能障礙給患者、家庭和社會帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。一直以來，腦梗死后神經(jīng)系統(tǒng)的可塑性和相關(guān)的神經(jīng)康復(fù)倍受專注。探索最大限度地激活腦梗死患者大腦的對抗損傷及重塑潛能的康復(fù)方法，以使患者獲得更好功能恢復(fù)，提高其生存質(zhì)量顯得非常有意義。
　　 目的：
　　 本研究提出腦缺血后EA+rTMS治療可活化AST，再通過后者有效地促進(jìn)海馬突觸結(jié)構(gòu)和功能的重塑，從而促進(jìn)腦缺血

2、后學(xué)習(xí)記憶功能恢復(fù)的假說，希望通過此項研究能揭示EA+rTMS治療缺血性卒中的可能機(jī)制，為進(jìn)一步的完善、豐富針灸學(xué)原理和磁刺激作用機(jī)理提供科學(xué)實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 本研究以MCAO模型為研究對象，將Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、EA組、rTMS組和EA+rTMS組，根據(jù)不同時間點每個組又細(xì)分為7d、14d和28d組3個亞組，分別給予EA、rTMS、EA+rTMS干預(yù)。在不同時間點處死動物取材，首先采用

3、免疫熒光標(biāo)記方法觀察不同時間點、不同干預(yù)后梗塞灶周圍及缺血側(cè)海馬CA3區(qū)AST特異性標(biāo)志物GFAP蛋白及缺血側(cè)海馬CA3區(qū)突觸前膜蛋白SYN的表達(dá)，免疫組化方法考察缺血側(cè)海馬突觸后膜蛋白PSD-95的時間分布規(guī)律；然后運用蛋白印跡技術(shù)定量分析不同時間點、不同組別之間缺血側(cè)海馬SYN表達(dá)的差異；最后采用Morris Water Maze實驗評估腦缺血28d大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的變化，透射電鏡觀察缺血側(cè)海馬CA3區(qū)突觸形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化。
　

4、　 結(jié)果:
　　 1、腦缺血7d時，各組大鼠腦梗塞病灶周圍及腦缺血側(cè)海馬CA3區(qū)均可見到AST的活化，主要表現(xiàn)為細(xì)胞胞體肥大、突起增多、熒光強(qiáng)度增加，3個康復(fù)干預(yù)組AST活化更加明顯。14d時3個康復(fù)干預(yù)組GFAP陽性細(xì)胞進(jìn)一步增多（P<0.05），28d時與14d時比較GFAP的表達(dá)減少，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。7d和28d時EA+rTMS組缺血側(cè)海馬CA3區(qū)GFAP的表達(dá)高于EA組和rTMS組（P<0.05）。
　　

5、2、腦缺血7d時，海馬DG區(qū)和CA3區(qū)PSD-95蛋白的表達(dá)下降。經(jīng)過14d和28d的康復(fù)干預(yù)，各組大鼠海馬DG區(qū)和CA3區(qū)PSD-95蛋白的表達(dá)與模型組比較均增加，至28d時差異有統(tǒng)計學(xué)意義。28d時，EA+rTMS組大鼠海馬CA3區(qū)PSD-95蛋白的表達(dá)高于EA組和rTMS組（P<0.05）。
　　 3、EA、rTMS和EA+rTMS都能顯著上調(diào)3個時間點海馬SYN的表達(dá)。從時間上看，隨著治療時間的增加，SYN的表達(dá)逐步上調(diào)

6、；不同組間比較，28d時rTMS和EA+rTMS海馬SYN的表達(dá)最顯著。
　　 4、在Morris Water Maze訓(xùn)練的第1d-3d，5組大鼠的潛伏期均逐漸縮短，各康復(fù)干預(yù)組與模型組比較差異不明顯。在訓(xùn)練的第4d、5d，3個康復(fù)干預(yù)組潛伏期明顯降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。在測試中，模型組大鼠的逃避潛伏期比正常組明顯延長；60s內(nèi)跨越平臺次數(shù)減少,tP/tT和dP/dT下降，均提示模型組

7、大鼠存在一定的學(xué)習(xí)記憶功能障礙。3個康復(fù)干預(yù)組大鼠的逃避潛伏期縮短，60s內(nèi)跨越平臺次數(shù)增加，tP/tT和dP/dT上升，與模型組比較差異有顯著性意義(P<0.05或P<0.01)，提示經(jīng)過康復(fù)干預(yù)之后，腦缺血大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能明顯改善。3個康復(fù)干預(yù)組間比較，EA+rTMS組大鼠的逃避潛伏期和60s內(nèi)跨越平臺次數(shù)與EA組和rTMS組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 5、模型組大鼠海馬CA3區(qū)突觸多為對稱性突觸，突觸小

8、泡明顯減少，線粒體變性明顯。EA組、rTMS組和EA+rTMS組突觸多表現(xiàn)為凹型或凸型的不對稱性突觸，突觸小泡明顯增多，細(xì)胞漿內(nèi)線粒體雙層結(jié)構(gòu)完整，線粒體內(nèi)嵴清楚。突觸形態(tài)圖像分析統(tǒng)計結(jié)果顯示：各組間突觸間隙寬度無顯著性差異。3個康復(fù)干預(yù)組PSD厚度、穿孔性突觸百分率比模型組顯著增加，3組間比較無顯著差異。3個康復(fù)干預(yù)組CA3區(qū)突觸的突觸界面曲率顯著增加，EA+rTMS組大于EA組和rTMS組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論:<

9、br>　　 1、EA、rTMS和EA+rTMS均可活化腦缺血大鼠梗塞灶周圍和缺血側(cè)海馬CA3區(qū)AST，這種活化不是單方向的上調(diào)。
　　 2、隨著干預(yù)時間的延長，EA、rTMS和EA+rTMS均可逐步增加腦缺血海馬SYN和PSD-95的表達(dá)。
　　 3、EA、rTMS和EA+rTMS可提高腦缺血大鼠學(xué)習(xí)記憶功能和改善腦缺血大鼠海馬突觸的超微結(jié)構(gòu)。
　　 4、EA+rTMS在促進(jìn)AST活化和海馬突觸重塑中優(yōu)于EA和