GSTs、CAT基因多態(tài)性與疾病易感性分析及功能研究.pdf

1、白癜風(fēng)是臨床常見(jiàn)的色素脫失性疾病，關(guān)于黑素細(xì)胞破壞或凋亡的病理機(jī)制眾說(shuō)紛紜，從若干角度提出研究假說(shuō)，涉及遺傳、自身免疫、神經(jīng)介質(zhì)、氧化應(yīng)激、細(xì)胞毒作用、微環(huán)境紊亂等諸多方面。近年的研究表明，氧化應(yīng)激產(chǎn)生大量活性氧自由基及脂質(zhì)過(guò)氧化物等，在觸發(fā)黑素細(xì)胞破壞或功能障礙方面扮演重要角色。氧化-抗氧化機(jī)制穩(wěn)定的情況下，機(jī)體應(yīng)對(duì)環(huán)境物理、化學(xué)刺激時(shí)，抗氧化劑能夠迅速清除有害自由基，保護(hù)機(jī)體免受氧化損傷。具有特殊遺傳背景（存在致病性遺傳變異）的個(gè)體

2、，黑素細(xì)胞抵御外界有害刺激能力下降，抗氧化機(jī)制失調(diào)，細(xì)胞容易發(fā)生壞死或凋亡。
　　過(guò)氧化氫酶（catalase）、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GlutathioneS-transferaseGSTs）是重要的抗氧化酶，其編碼基因變異有可能造成蛋白表達(dá)或功能異常。目前尚無(wú)抗氧化酶基因多態(tài)性與漢族人白癜風(fēng)相關(guān)性的研究，因此我們以西北漢族人群為研究對(duì)象，通過(guò)大規(guī)模病例-對(duì)照研究，檢測(cè)分析抗氧化酶編碼基因CAT、GSTM1、GSTT1、GSTP1

3、啟動(dòng)子區(qū)或外顯子區(qū)重要單核甘酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphismSNP)位點(diǎn)的分布頻率，探討突變型個(gè)體與白癜風(fēng)易感性的關(guān)系，并對(duì)啟動(dòng)子區(qū)SNP位點(diǎn)進(jìn)行初步功能學(xué)研究，從分子機(jī)制初步闡述抗氧化酶基因遺傳變異在白癜風(fēng)發(fā)病中的作用，為白癜風(fēng)機(jī)理研究和臨床治療提供線索和理論依據(jù)。
　　方法：
　　本實(shí)驗(yàn)收集749例白癜風(fēng)患者和763例正常人DNA樣本，通過(guò)PCR-RFLP和多重PCR的方法檢測(cè)了4個(gè)基因

4、共8個(gè)SNP位點(diǎn)(GSTT1、GSTM1、GSTP1Ile104Val、GSTP1Ala113Val、GSTP1Gly169Asp、CAT-89A>T、CAT389C>T、CAT419C>T)的基因型，SAS軟件統(tǒng)計(jì)白癜風(fēng)患者和正常人群中的分布頻率，分析其與疾病的關(guān)聯(lián)性。對(duì)CAT基因啟動(dòng)子區(qū)SNP進(jìn)行初步功能學(xué)研究，構(gòu)建含啟動(dòng)子區(qū)不同等位基因的重組質(zhì)粒，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞，利用熒光素酶報(bào)告基因分析啟動(dòng)子區(qū)單點(diǎn)突變對(duì)基因轉(zhuǎn)錄活性的影響，ELIS

5、A檢測(cè)不同基因型個(gè)體血清中過(guò)氧化氫酶活性。
　　結(jié)果：
　　1.GSTT1基因缺失型個(gè)體罹患白癜風(fēng)的風(fēng)險(xiǎn)增高(校正OR1.42,95％可信區(qū)間1.16-1.75)，而GSTM1基因缺失僅表現(xiàn)為風(fēng)險(xiǎn)性增加趨勢(shì)(P=0.059,校正OR1.22,95％可信區(qū)間0.99-1.49)；GSTT1/GSTM1聯(lián)合基因缺失的個(gè)體更容易發(fā)生白癜風(fēng)(校正OR1.71,95％可信區(qū)間1.28-2.28)。
　　2.GSTP1基因3個(gè)多態(tài)

6、性位點(diǎn)中，GSTP1Ile104Val在白癜風(fēng)患者和正常人群中分布無(wú)明顯差異，GSTP1Ala113Val和GSTP1Gly169Asp在本研究樣品中僅檢測(cè)到極少數(shù)變異，提示不同種族間基因突變頻率存在差異。
　　3.CAT-89A>T位點(diǎn)等位基因在白癜風(fēng)患者和正常人群中分布有顯著差異，攜帶突變基因型的個(gè)體患病風(fēng)險(xiǎn)增高；CAT389C>T位點(diǎn)與疾病無(wú)明顯關(guān)系；CAT419C>T位點(diǎn)在本研究入選樣本中表現(xiàn)同質(zhì)性。
　　4.CAT

7、-89A>T和CAT389C>T存在協(xié)同作用，個(gè)體患病風(fēng)險(xiǎn)隨等位基因突變個(gè)數(shù)增加而增加；CAT-89A>T和CAT389C>T之間也有相互作用，CAT-89AT基因型個(gè)體常攜帶CAT389TT基因型，其患病風(fēng)險(xiǎn)大大增加(校正OR1.71,95％可信區(qū)間1.59-5.64)。
　　5.經(jīng)軟件分析預(yù)測(cè)及熒光素酶報(bào)告基因分析，CAT-89A>T位點(diǎn)發(fā)生遺傳變異(A→T)后，轉(zhuǎn)錄活性發(fā)生明顯改變；含突變等位基因的序列可能結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子Sp1

8、，影響正常轉(zhuǎn)錄。
　　6.同正常人群相比，白癜風(fēng)患者血清中過(guò)氧化氫酶活性明顯下降；CAT-89不同基因型個(gè)體血清過(guò)氧化氫酶活性無(wú)顯著差異。
　　結(jié)論：
　　1.GSTT1基因和GSTM1基因與漢族人白癜風(fēng)有顯著相關(guān)性，基因缺失的個(gè)體患病風(fēng)險(xiǎn)增高；GSTP1基因外顯子區(qū)Ile104Val、Ala113Val和Gly169Asp3個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)對(duì)白癜風(fēng)發(fā)病無(wú)明顯影響。
　　2.CAT-89A>T多態(tài)性位點(diǎn)與白癜風(fēng)發(fā)病有