“痰壅胞宮”生物學(xué)基礎(chǔ)及其效應(yīng)（6）——基于卵巢顆粒細(xì)胞胰島素抵抗及其中藥干預(yù)機(jī)制.pdf

1、目的：通過(guò)觀察胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)抑制劑沃曼青霉素(wortmannin)誘導(dǎo)胰島素抵抗(IR)后關(guān)鍵信號(hào)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(Glut<,4>)、絲裂原激活蛋白激酶(MAPK)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)，探討IR信號(hào)傳導(dǎo)分子機(jī)理；研究胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-I)刺激作用下對(duì)豬卵巢胰島素抵抗與正常顆粒細(xì)胞性激素生成及細(xì)胞色素芳香化酶(P450arom)、膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)和類固醇激素急性調(diào)節(jié)蛋白(StAR)

2、mRNA的影響；中西藥胰島素增敏劑曲格列酮、二甲雙胍和小檗堿、丹參酮對(duì)IR的影響。 方法：對(duì)豬卵巢顆粒細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，用PI-3K抑制劑wortmannin誘導(dǎo)IR模型，以氚三標(biāo)記葡萄糖檢測(cè)細(xì)胞中的糖元量，葡萄糖氧化酶法檢測(cè)細(xì)胞的葡萄糖消耗量，以化學(xué)發(fā)光法測(cè)定培養(yǎng)液中雌二醇(E<,2>)、孕酮(P)、睪酮(T)的水平，以免疫熒光對(duì)Glut4、MAPK、PPAR γ蛋白定性分析，以Western Blot對(duì)Glut4、PPAR

3、γ蛋白表達(dá)定量分析，以逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)對(duì)Glut<,4>、MAPK、P450scc和StAR mRNA半定量分析，以實(shí)時(shí)熒光PCR對(duì)P450arom、PPAR γ定量分析。 結(jié)論： (1)wortmannin阻斷PI-3K信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生IR，關(guān)鍵信號(hào)Glut<,4>表達(dá)下降影響新陳代謝信號(hào)通路，產(chǎn)生IR，而MAPKmRNA水平升高，進(jìn)而影響有絲分裂信號(hào)通路，說(shuō)明卵巢中存在交替的胰島素信號(hào)通路。

4、(2)首次提出應(yīng)用通過(guò)PI-3K抑制物Wortmannin誘導(dǎo)胰島素抵抗的造模的方法，引起胰島靶組織對(duì)葡萄糖的攝取和利用減少，通過(guò)氚三標(biāo)記葡萄糖及葡萄糖氧化酶法得到驗(yàn)證。 (3)IGF-1刺激了顆粒細(xì)胞P450arom、StAR、P450sccmRNA的表達(dá)，引起雌激素分泌的增加。IR以后IGF-1的干預(yù)刺激雄激素的合成和分泌，StAR、P450scc的表達(dá)明顯增加了。 (4)提出IGF-I在卵泡發(fā)育中的作用和細(xì)胞內(nèi)的信