alphastatin抑制胃癌細胞裸鼠移植瘤血管新生的實驗研究.pdf

1、胃癌是一種常見的危害人類健康的疾病，其治療方式主要依賴于手術切除，術后采用以化療為主的輔助治療。研究表明，胃癌血管新生在其發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。近年來，腫瘤血管新生抑制劑已成為惡性腫瘤治療領域的熱點，有些正在臨床試驗中。alphastatin具有很強的抑制血管內(nèi)皮細胞管狀結構形成和抗鼠源性CT26生長的作用，顯示出良好的應用前景。為此，我們開展了alphastatin治療胃癌及其作用機理的研究。目的是評價alphastat

2、in抑制胃癌血管新生的可行性和有效性，為進一步研究治療其他惡性腫瘤提供實驗基礎；進一步探討alphastatin發(fā)揮血管新生的作用機制，為闡述其生物學活性提供理論依據(jù)。 利用標準細胞分離方法獲得人血管內(nèi)皮細胞(HUVECs)。我們分別觀察了alphastatin對HUVECs遷移、增殖和管狀結構形成等功能的影響。體外實驗結果證實，alphastatin對HUVECs增殖無明顯影響，也不會產(chǎn)生細胞毒性。alphastatin可明顯

3、抑制由HGF趨化引起HUVECs的遷移功能和Matrigel管狀結構形成的作用，且呈現(xiàn)一定的量-效關系。隨后，我們分別觀察了alphastatin對裸鼠體內(nèi)MatrigelPlug新生血管和裸鼠移植人胃癌腫瘤細胞生長狀況的影響，并對腫瘤組織進行病理學檢查。MatrigelPlug結果表明，alphastatin幾乎能夠完全抑制裸鼠體內(nèi)新生血管的形成。通過裸鼠皮下注射人源性胃癌細胞(BGC823)，我們建立了裸鼠移植瘤模型，對觀察組裸鼠腹

4、腔注射alphastatin，2周后分析裸鼠瘤體大小、重量、腫瘤血管密度等多項指標。裸鼠移植瘤實驗結果證實，隨著劑量的增大，alphastatin抑制腫瘤體積和重量的效應更加明顯。組織病理學分析表明，觀察組腫瘤組織內(nèi)部血管數(shù)目較對照組中減少。 基于鞘脂類生長因子(尤其SPK，S1P)在血管新生方面扮演角色的理論基礎。我們觀察了alphastatin對腫瘤組織內(nèi)分離的血管內(nèi)皮細胞SPK活性的影響。將血管內(nèi)皮細胞經(jīng)alphastat

5、in進行預處理，提取細胞總蛋白，測定細胞內(nèi)SPK活性。結果證實，alphastatin能夠降低血管內(nèi)皮細胞內(nèi)SPK活性，呈現(xiàn)量-效關系。當作用時間為6h時，血管內(nèi)皮細胞內(nèi)SPK活性降低最明顯，隨著時間的延長，SPK活性有所恢復。 通過以上結果，我們可以得出：(1).alphastatin體外發(fā)揮抑制HUVECs遷移及管狀結構形成的作用，而對增殖沒有產(chǎn)生顯著影響，說明alphastatin可能作用于與遷移和管狀結構形成相關的某些因