早期小肝癌與癌前病變微衛(wèi)星變異特點及其臨床病理學意義的研究.pdf

1、背景和目的： 肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是我國最常見的惡性腫瘤之一，因而一直是我國研究的重點腫瘤之一。HCC之所以目前治療效果仍不盡如人意，其中很重要的原因之一是我們至今仍不知道人體早期小HCC具有何種分子生物學特征；對早期相對良性小，HCC向晚期惡性狀態(tài)演變的分子機制的認識尚屬空白，此種狀況也導致了目前對小HCC概念的混亂。 目前依據(jù)HCC瘤體大小設定的標準有5cm，4.5cm

2、，4cm，3.5cm，3cm，2.5cm不等，缺乏分子生物學意義上的理論依據(jù)，這種狀況嚴重影響了臨床對早期小HCC診斷與治療水平的提高，成為制約肝臟外科進一步發(fā)展的瓶頸之一，臨床上迫切需要小HCC的新理論和新概念用于指導醫(yī)療實踐。 現(xiàn)代腫瘤分子生物學研究表明，腫瘤是一種基因病，是由多基因變異并長期累積所致。單個基因的變異并不足以完成從正常細胞惡性轉化→癌前病變→早期腫瘤→晚期腫瘤的整個復雜過程，而需要一組腫瘤相關基因的連續(xù)動態(tài)變

3、異才可以完成。顯然，從基因組不穩(wěn)定性的角度探討早期HCC形成與演進的分子機制，有可能成為認識早期小HCC病理生物學特性演變規(guī)律的重要突破口。 根據(jù)以上分析，本研究設計了對HCC癌前病變——異型增生結節(jié)(dysplasticnodule，DN)、微小HCC(Micro HCC，d<1cm)、小HCC(small HCC，d<3cm)和大HCC(large HCC，d>3cm)4組病變以及肝臟良性腫瘤肝細胞腺瘤(hepatocell

4、ularadenoma，HCA)進行覆蓋6條染色體的64個微衛(wèi)星標志物的基因組不穩(wěn)定性檢測，旨在詳細探討早期HCC的分子生物學特性，并尋找具有臨床實際應用價值的早期小HCC的微衛(wèi)星診斷譜系。 方法： 采用PCR-非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳和硝酸銀染色技術，對199例HCC中40個微衛(wèi)星多態(tài)性標記物的2種變異特征——雜合子缺失(loos of heterozygosity，LOH)和微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatellit

5、e instability，MSI)進行檢測；應用毛細管電泳測序技術對49例HCC、10例HCA和8例DN進行了五條染色體臂24個位點的微衛(wèi)星變異檢測。各位點基因組不穩(wěn)定情況與臨床病理學特點的關系用卡方檢驗或Fisher確切概率法進行檢驗，各組病變片段等位基因缺失(FAL)值比較用t-test，P<0.05為有統(tǒng)計學意義。 結論： HCC存在廣泛的微衛(wèi)星變異，一些基因座如D1S507，D4S415，D4S1538，D4S

6、406，D4S426，D8S520，D8S264，D8S277，D8S261和D16S515發(fā)生高頻LOH。其中以代表腫瘤抑制基因路徑的LOH方式在 HCC的發(fā)生和發(fā)展過程中起主要作用，代表錯配修復基因路徑的MSI的作用次之。在一些特定染色體區(qū)的等位基因缺失與 HBV 感染、血清AFP水平、腫瘤大小、肝硬化、Edmondson分級、腫瘤包膜突破等相關。 HCA、DN在部分位點發(fā)生LOH，與HCC有重疊，提示在正常細胞轉化為病變的