PTEN基因與肽類生長(zhǎng)因子胰島素、抗氧化蛋白Cu-ZnSOD關(guān)系的研究.pdf

1、目的：研究胰島素和PTEN在調(diào)控.Akt激酶活性中的作用及相互關(guān)系；初步探討PTEN缺失是否影響Cu/Zn SOD表達(dá)水平及其意義；探討PTEN表達(dá)水平的差異與胰島素及Cu/Zn SOD的關(guān)系及其在腫瘤發(fā)生發(fā)展機(jī)制中的作用，以更全面的認(rèn)識(shí)抑癌基因PTEN，從而更有效的輔佐臨床腫瘤的靶向治療。 方法：胰島素及NADPH氧化酶抑制劑DPI分別作用于對(duì)照小鼠胚胎成纖維細(xì)胞PTEN+/+MEFs和PTEN基因敲除的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞PT

2、EN-/-MEFs，Western Blot檢測(cè)Akt激酶磷酸化水平的變化；MTT檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)變化；Western Blot及Northem Blot檢測(cè)PTEN+/+MEFs及PTEN-/-MEFs內(nèi)Cu/Zn SOD表達(dá)水平的差異；單細(xì)胞堿性電泳檢測(cè)細(xì)胞DNA損傷程度；熒光探針標(biāo)記檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)超氧陰離子水平；MTT檢測(cè)H2O2對(duì)細(xì)胞增殖狀況的影響。 結(jié)果：對(duì)照PTEN+/+ MEFs細(xì)胞內(nèi)，胰島素使Akt激酶磷酸化水平上調(diào)，D

3、PI處理后，Akt激酶磷酸化回復(fù)基礎(chǔ)水平，在PTEN缺失的PTEN4-/-MEFs細(xì)胞內(nèi)未觀察到上述變化；胰島素作用對(duì)照PTEN+/+MEFs細(xì)胞后細(xì)胞增殖加快，DPI作用后細(xì)胞增殖減慢，胰島素對(duì)其增殖的促進(jìn)作用消失；各種處理因素對(duì)PTEN-/-MEFs細(xì)胞增殖影響不大；在PTEN缺失細(xì)胞系PTEN-/-MEFs中，Cu/Zn SOD在蛋白及mRNA水平上均表達(dá)下調(diào)，細(xì)胞內(nèi)超氧陰離子水平明顯增高，空白組及H2O2處理后DNA損傷程度均較

4、PTEN+/+MEFs細(xì)胞重，H2O2對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用減弱。 結(jié)論：肽類生長(zhǎng)因子胰島素活化Akt激酶依賴于H2O2的產(chǎn)生和抑癌基因PTEN的存在；PTEN缺失細(xì)胞內(nèi)Cu/Zn SOD表達(dá)下調(diào)，并由此引起細(xì)胞內(nèi)活性氧持續(xù)高水平和氧化損傷的累積以及活性氧對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用減弱；說(shuō)明肽類生長(zhǎng)因子在PTEN表達(dá)陽(yáng)性的情況下，能通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生H2O2活化細(xì)胞增殖通路P13K/Akt，加快細(xì)胞生長(zhǎng)增殖從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生；反之，Cu/