大黃素對T淋巴細(xì)胞白血病Jurkat、Molt-4細(xì)胞株增殖、凋亡的影響及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的:①研究中藥大黃素對人T淋巴細(xì)胞白血病Jurkat、Molt-4細(xì)胞株增殖、凋亡的影響。②觀察大黃素對Jurkat、Molt-4細(xì)胞增殖、凋亡相關(guān)基因及蛋白表達(dá)水平的影響，探討其作用機(jī)制。③觀察大黃素對Jurkat、Molt-4細(xì)胞作用后PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中蛋白表達(dá)的變化。 方法:應(yīng)用MTT法繪制細(xì)胞生長曲線、細(xì)胞克隆形成實驗觀察大黃素對Jurkat、Molt-4細(xì)胞增殖的影響；DNA片段化分析、Annexin V

2、/PI雙染流式細(xì)胞檢測、末端缺口原位標(biāo)記(TUNEL)法及DNA倍體分析檢測大黃素對細(xì)胞凋亡的影響；蛋白印跡法(Western-Blot)檢測c-myc、bcl-2、pro-與cleaved caspase-3、pro-caspase-8、pro-caspase-9、PARP蛋白以及PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中蛋白表達(dá)水平的變化。 結(jié)果:(1)細(xì)胞生長曲線結(jié)果顯示大黃素能明顯抑制Jurkat、Molt-4細(xì)胞增殖，48h半數(shù)抑

3、制濃度(IC50)分別為20.7μmol·L-1和25.1μmol·L-1。DNA片段化、DNA倍體分析亞二倍體峰、TUNEL法凋亡細(xì)胞的檢出及Annexin V/PI雙染流式細(xì)胞檢測等證實大黃素能有效誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞凋亡，細(xì)胞凋亡率在一定的藥物濃度范圍內(nèi)與藥物作用濃度和作用時間呈正相關(guān)。DNA片段化的檢出同樣表明大黃素可誘導(dǎo)Molt-4細(xì)胞凋亡。(2)80μmol·L-1大黃素作用Jurkat細(xì)胞不同時間和不同濃度大黃素作用Jur

4、kat細(xì)胞后，c-myc、bcl-2、hTERT、pro-caspase-3、pro-caspase-8、procaspase-9蛋白表達(dá)下調(diào)，同時cleaved caspase-3和cleaved PARP蛋白的表達(dá)上調(diào)，并呈量效與時效關(guān)系。相同濃度大黃素作用Molt-4細(xì)胞后，bcl-2、c-myc、hTERT與procaspase-3蛋白表達(dá)下調(diào)。(3)大黃素可作用于Jurkat、Molt-4細(xì)胞Akt信號通路，下調(diào)Jurkat細(xì)

5、胞中p-Akt、IkB-α、p-IkB-α、p-NF-kB、mTOR、p-mTOR、GSK-3β、p-GSK-3β、MAPK和p-MAPK的表達(dá)，而Akt、NF-kB表達(dá)變化不明顯，Bad表達(dá)上調(diào)；大黃素還下調(diào)Molt-4細(xì)胞中Akt、p-AKT、m-TOR、p-mTOR蛋白表達(dá)。 結(jié)論:(1)大黃素能有效抑制Jurkat、Molt-4細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其凋亡，在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量時間效應(yīng)關(guān)系。大黃素可能是通過下調(diào)c-myc、bc