Urocortin抑制血管內(nèi)皮生長因子改善糖尿病腎病.pdf

1、糖尿病腎病是糖尿病最常見、最嚴重的慢性微血管并發(fā)癥之一，是糖尿病患者的主要死亡原因。因此，積極尋求有效措施防治糖尿病腎病具有重要意義。臨床上，糖尿病腎病主要表現(xiàn)為蛋白尿、高血壓、進行性腎功能損害。腎小球系膜細胞(GMCs)增殖、細胞外基質(zhì)(ECM)堆積引起的系膜擴張是該病發(fā)展過程中的一個重要病理改變。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)由于其強大的促血管通透性以及促進細胞增殖、分化，改變ECM，促血管生成等功能介導了糖尿病腎病蛋白尿的產(chǎn)生以及系

2、膜擴張等重要病理變化，在糖尿病腎病發(fā)病中的作用越來越受到人們的關注。 Urocortin(UCN)是促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)肽類家族中的新成員，自被發(fā)現(xiàn)以來，其在心血管系統(tǒng)功能調(diào)節(jié)中發(fā)揮的多方面重要作用被不斷證實，并且UCN能顯著減少大鼠血管平滑肌細胞(VSMCs)VEGF的釋放，抑制VSMCs增殖，抑制毛細血管形成。本實驗室在體實驗發(fā)現(xiàn)UCN通過下調(diào)肝癌組織VEGF水平抑制腫瘤生長和新生血管的生成。 本研究探

3、討UCN對糖尿病腎病大鼠腎臟組織VEGF表達的影響，進而探索UCN對糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展的影響及其作用機制。采用小劑量多次注射鏈脲菌素(STZ)聯(lián)合弗氏完全佐劑(CFA)同時輔以高脂飲食的方法建立大鼠糖尿病腎病動物模型。自實驗開始第7周給藥，連續(xù)8周每日給予大鼠腹腔注射UCN(6 μg·kg-1)或UCN(6 μg·kg-1)+astressin(30 μg·kg-1)，檢測大鼠血糖、體重變化，給藥結束后檢測相關的血清生化、尿液指標，通過

4、H-E染色和PAS染色評價腎臟病變程度，應用RT-PCR方法半定量檢測腎臟組織VEGF mRNA表達情況，利用免疫組化技術觀察腎小球VEGF、轉化生長因子(TGF-β1)的表達。實驗結果表明，UCN可以明顯降低模型動物的腎臟重量，但是對模型動物的血糖、體重、腎指數(shù)均無明顯影響；UCN能顯著降低模型動物血清中尿素氮、肌酐濃度及丙二醛(MDA)含量，提高肌酐清除率和血清超氧化物歧化酶(SOD)活性；降低模型動物24h尿量、尿蛋白、尿微量白蛋

5、白排出量，增加尿尿素氮、尿肌酐排出量；減輕腎臟系膜區(qū)增寬，基質(zhì)增多等病理變化；抑制模型動物腎小球VEGF、TGF-β1的過度表達。這些作用絕大多數(shù)受CRH受體(CRHR)拮抗劑astressin的影響。本文離體部分用TGF-β1(2ng/ml)刺激GMCs分泌VEGF，同時給予不同濃度的UCN，孵育12h。采用Elisa法定量檢測細胞上清液中VEGF的含量。結果發(fā)現(xiàn)，UCN可以濃度依賴性地抑制TGF-β1誘導的VEGF的分泌，5x10-