NK細(xì)胞功能異常導(dǎo)致HBV慢性免疫逃逸和急性肝再生抑制的機(jī)制研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(HBV)感染是導(dǎo)致慢性肝炎、肝硬化、肝癌的主要病因之一，嚴(yán)重威脅人類的健康。作為一種非細(xì)胞毒性嗜肝病毒，HBV可在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，病毒本身并不造成肝細(xì)胞的破壞，但由此引起的免疫應(yīng)答一方面有利于清除病毒，另一方面也可導(dǎo)致肝臟損傷。傳統(tǒng)理論認(rèn)為CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞在抗HBV感染及其引起的免疫損傷中起主導(dǎo)作用，但是隨著肝臟天然免疫系統(tǒng)理論的提出，肝臟中的天然免疫細(xì)胞在HBV感染及其免疫致病中發(fā)揮的效應(yīng)引起學(xué)者們的高度重視

2、，尤其是NK細(xì)胞在HBV感染中的作用越來越受到關(guān)注。研究表明NK細(xì)胞參與HBV感染后的免疫應(yīng)答，HBV逃逸NK細(xì)胞的清除作用與病毒持續(xù)性感染密切相關(guān)。同時(shí)慢性HBV感染者對(duì)于外界因素如化學(xué)毒物、酒精、細(xì)菌感染等刺激后肝細(xì)胞更加容易損傷，影響了肝臟后續(xù)的再生能力。
　　 本研究通過對(duì)HBV DNA復(fù)制水平不同的病毒感染者進(jìn)行分組，探討NK細(xì)胞在HBV感染者免疫應(yīng)答中的作用，通過流式細(xì)胞術(shù)分析不同HBV感染狀態(tài)的病人外周血NK細(xì)胞的

3、比例、功能、表面活化性受體和抑制性受體的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)HBVDNA病毒載量增高患者伴隨NKG2A+NK細(xì)胞比例升高，NKG2A抑制NK細(xì)胞抗病毒活性導(dǎo)致HBV持續(xù)感染，可能是HBV逃逸NK細(xì)胞攻擊的原因之一，阻斷NKG2A有可能成為治療HBV持續(xù)感染的靶點(diǎn)。同時(shí)在化學(xué)毒物誘導(dǎo)的小鼠模型中觀察到肝臟NK細(xì)胞對(duì)于肝臟損傷后再生的影響，為了解慢性HBV感染者在接觸化學(xué)毒物后NK細(xì)胞對(duì)于肝臟的修復(fù)能力提供研究基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果分以下兩部分：

4、　　 (一)NK細(xì)胞高表達(dá)NKG2A介導(dǎo)HBV慢性免疫逃逸
　　 1.病毒復(fù)制限制性CHB病人NK細(xì)胞比例增高
　　 在病毒復(fù)制水平受到限制的CHB病人(HBV DNA＜105copies/ml)外周血中NK細(xì)胞較正常對(duì)照組、病毒復(fù)制水平較高組和肝硬化病人明顯升高，并且與HBVDNA拷貝數(shù)和血清ALT呈明顯負(fù)相關(guān)，說明NK細(xì)胞減少不利于HBV的清除和病情的緩解。進(jìn)一步對(duì)NK細(xì)胞的功能分析發(fā)現(xiàn)：IL-12體外刺激病毒復(fù)制

5、限制性CHB病人NK細(xì)胞后，其分泌IFN-γ的能力要明顯高于高病毒復(fù)制的CHB病人和正常對(duì)照組；NK細(xì)胞殺傷試驗(yàn)證明，病毒復(fù)制限制性CHB病人與高病毒載量的CHB病人相比，NK細(xì)胞表達(dá)CD107a、殺傷K562細(xì)胞的能力明顯增強(qiáng)。
　　 2.HBV DNA拷貝數(shù)升高患者伴隨NKG2A+NK細(xì)胞升高
　　 對(duì)大量HBV病人進(jìn)行NK細(xì)胞活化性受體和抑制性受體檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，不同研究對(duì)象活化性受體NKG2D，NKG2C，NKp30，

6、NKp44，NKp46，抑制性受體KIR2DL3，KIR3DL1，CD158b，CD158a等均無明顯改變，但抑制性受體NKG2A有明顯改變，在低拷貝病人中NKG2A的表達(dá)較低，在高拷貝病人和肝硬化病人中NKG2A+NK細(xì)胞比例明顯增高，并且與HBV DNA病毒載量和ALT表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，說明NKG2A的高表達(dá)抑制了NK細(xì)胞的活化，不利于HBV清除和病情緩解。
　　 3.阻斷NKG2A能恢復(fù)HBV持續(xù)感染者NK細(xì)胞功能，甚至清

7、除HBV
　　 (二)NK細(xì)胞高分泌TNF-α抑制急性肝臟損傷后再生
　　 上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示NK細(xì)胞對(duì)于清除HBV感染有重要作用，但同時(shí)NK細(xì)胞也可導(dǎo)致部分肝臟損傷，鑒于肝臟損傷均伴隨肝臟自身的再生修復(fù)，本研究將進(jìn)一步探討NK細(xì)胞在肝臟再生的作用。我們采用了化學(xué)毒物CCl4誘導(dǎo)的肝臟損傷為肝臟再生模型，研究NK細(xì)胞的活化對(duì)于肝臟再生的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)鼠在同時(shí)注射了poly I∶C和CCl4之后能夠明顯抑制肝臟再生，用

8、AsGM1清除NK細(xì)胞或用NK1.1抗體清除NK1.1+細(xì)胞(包含NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞)，poly I∶C抑制的肝臟再生得到明顯恢復(fù)，提示NK細(xì)胞參與肝臟再生抑制。其機(jī)理是poly I∶C和CCl4能夠誘導(dǎo)肝臟中NK細(xì)胞的大量聚集和活化，細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-α的分泌明顯增高，并且體內(nèi)中和TNF-α而不是IFN-γ之后肝臟再生功能得到恢復(fù)。這些結(jié)果表明在CCl4誘導(dǎo)的肝臟損傷模型中poly I∶C活化的NK細(xì)胞通過分泌TNF-α抑