白藜蘆醇對(duì)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、研究背景和目的：
　　冠心?。╟oronary heart disease,CHD）是威脅人類健康的重大疾病之一。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，與其他發(fā)達(dá)國家生活方式相同的法國，冠心病的發(fā)病率、死亡率較低，這一現(xiàn)象稱為“法蘭西奇跡”（French Paradox）。究其原因是因?yàn)榉▏诉M(jìn)餐時(shí)飲用適量的紅葡萄酒，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)其中起主要作用的是白藜蘆醇（resveratrol,Res）。白藜蘆醇具有廣泛的生理藥理學(xué)作用，如抗氧化、清除自由基作用

2、，抑制血小板聚集，調(diào)節(jié)血脂，防止動(dòng)脈粥樣硬化，抗炎，抗真菌，抗腫瘤，保肝作用等。本實(shí)驗(yàn)主要研究白藜蘆醇對(duì)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞（cardiac microvascular endothelial cells,CMECs）體外模擬缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　第一部分：CMECs的分離培養(yǎng)及鑒定
　　1．取SD大鼠左心室，以酶消化法分離出心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞，在DMEM完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并定期觀察；<

3、br>　　2．用Dil-Ac-LDL與DAPI免疫熒光雙染法鑒定細(xì)胞。
　　第二部分：體外模擬缺血再灌注損傷，并隨機(jī)分為對(duì)照組（Con組）、缺血再灌注組（I/R組）及白藜蘆醇組（Res組）。
　　1．采用MTT比色法測定CMECs活力；
　　2．采用AnnexinV-FITC/PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測CMECs凋亡；
　　3．底物酶解法檢測caspase-3活性；
　　4．ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液上清中丙

4、二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性；
　　5．ELISA法測定培養(yǎng)液上清中TNF-α和IL-10的含量；
　　6．免疫熒光法檢測NF-кB的陽性細(xì)胞率。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：數(shù)值均以x±s表示。數(shù)據(jù)采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，應(yīng)用單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的采用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)一步比較。
　　結(jié)果：
　　1．細(xì)胞鑒定：細(xì)胞質(zhì)呈Dil-Ac-LDL陽性（紅色熒光），細(xì)

5、胞核呈DAPI陽性表達(dá)（籃色熒光），證實(shí)所得到的細(xì)胞為心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞。
　　2．I/R組較Con組細(xì)胞活性明顯降低（P<0.01）；與I/R組比較，Res組細(xì)胞活性明顯升高（P<0.01）。
　　3．與Con組比較，I/R組細(xì)胞凋亡率和caspase-3的相對(duì)活性均明顯升高（P<0.01）；與I/R組比較，Res組細(xì)胞凋亡率和caspase-3的相對(duì)活性均明顯降低（P<0.01）。
　　4．I/R組較Con組SOD

6、的活性和MDA含量均升高（P<0.05）；與I/R組比較，Res組SOD的活性明顯升高（P<0.01），MDA含量明顯降低（P<0.01）。
　　5．與Con組比較，I/R組TNF-α的含量明顯升高（P<0.01），IL-10的含量明顯降低（P<0.01）；與I/R組比較，Res組TNF-α的含量明顯降低（P<0.01），IL-10的含量明顯升高（P<0.01）。
　　6．I/R組較Con組NF-кB的陽性細(xì)胞率明顯升高（P