大鼠部分肝臟切除術(shù)后殘留肝臟和小體積供肝的保護(hù)研究.pdf

1、第一部分缺血預(yù)處理對(duì)大鼠部分肝臟切除術(shù)后殘留肝臟保護(hù)作用及機(jī)理研究.前言:自1963年美國Starzl教授主持完成人類第一例臨床肝臟移植術(shù)以來,肝臟移植技術(shù)日趨成熟,已成為治療終末期肝臟疾病的有效方法.但隨著肝臟移植術(shù)越來越多的開展,供肝短缺問題日益明顯.活體肝臟移植術(shù)(Living donor livertransplantation,LDLT)為克服尸體供肝尤其是兒童供肝短缺,并為無腦死亡法律國家與地區(qū)開展肝移植術(shù)開辟了一條新途徑.

2、LDLT的供體多為與受體有血緣關(guān)系的親屬,供肝和受體的組織相容性好,而且冷缺血時(shí)間較短,供肝質(zhì)量好.但LDLT的肝臟供體是正常人,術(shù)中即要保證供肝的質(zhì)量,更要保護(hù)供體殘留肝臟功能及其生命安全,受體安全第一.在LDLT中,切取活體部分供肝時(shí)常需阻斷肝臟血流以減少出血和確定供肝切除線.因此供體殘留肝臟存在熱缺血再灌注損傷.受體殘留肝臟損傷可影響其肝功能恢復(fù)甚至威脅其生命安全.因此在LDLT術(shù)中,供體殘留肝臟熱缺血再灌注損傷的保護(hù)十分重要.缺

3、血預(yù)處理(Ischemic Preconditioning,IPC)是指器官在一次較長(zhǎng)的缺血再灌注事件之前的短暫的缺血再灌注過程.近年來的研究發(fā)現(xiàn)IPC對(duì)肝臟缺血再灌注損傷有保護(hù)作用.一氧化氮(Nitric oxide,NO)介導(dǎo)了IPC對(duì)缺血再灌注肝臟的保護(hù)作用.IPC對(duì)LDLT術(shù)中供體殘留肝臟的熱缺血再灌注損傷是否具有保護(hù)作用?該實(shí)驗(yàn)在對(duì)SD大鼠肝臟進(jìn)行解剖觀察的基礎(chǔ)上建立大鼠部分肝臟切除術(shù)模型,探討IPC對(duì)大鼠部分肝臟切除術(shù)后殘留

4、肝臟是否有保護(hù)作用,并通過觀察肝臟組織NO濃度及內(nèi)皮型NO合成酶(eNOS)mRNA和誘導(dǎo)型NO合成酶(iNOS)mRNA的表達(dá)探討其作用機(jī)理,為臨床LDLT中供體殘留肝臟的保護(hù)提供理論指導(dǎo).結(jié)論:1.SD大鼠肝臟分為右葉(又分為右下葉和右上葉)、中葉(又分為右中葉和左中葉)、左側(cè)葉、尾狀葉(又分為尾狀前葉和尾狀后葉),其占全肝重量比分別為23％(7%和16%)、36%(24%和12%)、32%和9%(5%和4%).這對(duì)建立大鼠部分肝臟

5、切除術(shù)和小體積肝移植模型有指導(dǎo)意義.2.IPC對(duì)大鼠部分肝臟切除術(shù)后殘留肝臟的熱缺血再灌注損傷有保護(hù)作用.3.NO介導(dǎo)了熱缺血再灌注對(duì)大鼠部分肝臟切除術(shù)后殘留肝臟的損傷.4.IPC對(duì)大鼠部分肝臟切除術(shù)后殘留肝臟熱缺血再灌注損傷的保護(hù)作用是通過促進(jìn)肝臟再灌注早期eNOSmRNA的表達(dá)和抑制其稍后iNOSmRNA的表達(dá)而實(shí)現(xiàn).5.IPC對(duì)大鼠部分肝臟切除術(shù)后殘留肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用對(duì)肝臟外科中部分肝臟切除術(shù)后肝功能的保護(hù)尤其是活體部

6、分肝移植術(shù)中供體殘留肝臟的保護(hù)研究有指導(dǎo)意義,值得進(jìn)一步研究.第二部分缺血預(yù)處理對(duì)大鼠小體積供肝的保護(hù)作用及機(jī)理研究.前言:在LDLT中,切取活體部分供肝時(shí)常需阻斷肝臟血流以確定供肝切除線和減少出血.因此供肝存在熱缺血再灌注損傷,另外還存在大約2h的冷缺血損傷.材料和方法:1.大鼠小體積肝移植模型的建立及實(shí)驗(yàn)分組采用健康雄性SD大鼠,體重250~300g.用原位肝葉切除法獲取小體積供肝,受體和供體為體重和肥瘦相同或相近(相差3g以內(nèi))的

7、大鼠.供肝灌注前切除其左側(cè)葉(約占大鼠肝臟重約32%)獲得約70%小體積供肝.供肝植入方法與全肝移植術(shù)相同,參照Kamada和Calne的雙袖套法.120只大鼠均分為以下3組(n=20):(1)無熱缺血組(Nonwarm Ischemic,NWI):供肝游離后切除其左側(cè)葉,由腹主動(dòng)脈灌注0~4℃肝素乳酸林格氏液,灌注后切取供肝.供肝修剪后植入受體大鼠.冷缺血時(shí)間為2h.(2)單純?nèi)毖俟嘧⒔M(Ischemia,ISC):供肝游離后阻斷全

8、肝血流25min,期間切除肝臟左側(cè)葉,熱缺血25min后由腹主動(dòng)脈灌注0~4℃肝素乳酸林格氏液,灌注后切取供肝.供肝修剪后植入受體大鼠.冷缺血時(shí)間為2h.(3)缺血預(yù)處理組(Ischemic Preconditioning,IPC):阻斷全肝血流前行缺血預(yù)處理,即阻斷全肝血流10min后開放10min,再阻斷全肝血流25min,其余步驟同第2組.2.觀測(cè)指標(biāo)及檢測(cè)方法.2.1各組受體大鼠于術(shù)前1d、術(shù)后1、2、3及5d斷尾取血0.5ml

9、,用自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)其血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase,AST)及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase,ALT).2.2. NWI組于供肝灌注前及植入后0.5、1、2、3h取肝組織0.6g;ISC組于熱缺血前及植入后0.5、1、2、3h取肝組織0.6g;IPC組于IPC前、IPC后及植入后0.5、1、2、3h取肝組織0.6g.用硝酸還原法檢測(cè)其NO濃度,用熒光

10、定量-PCR法檢測(cè)其eNOSmRNA和iNOSmRNA的表達(dá).3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果.用x±s表示.結(jié)果分析采用t檢驗(yàn)或t'檢驗(yàn),P<0.05時(shí)差別有顯著性.結(jié)論:1.IPC對(duì)大鼠小體積供肝的缺血再灌注損傷有保護(hù)作用.2.NO介導(dǎo)了缺血再灌注對(duì)大鼠小體積供肝的損傷3.IPC對(duì)大鼠小體積供肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用是通過促進(jìn)移植肝臟再灌注早期eNOSmRNA的表達(dá)和抑制其稍后iNOSmRNA的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)4.IPC對(duì)小體積供肝缺血再灌注損傷的保