莜麥Permatin蛋白原核表達(dá)與抑制真菌作用的機(jī)制探究.pdf

1、類(lèi)甜蛋白（TLP）屬于病程相關(guān)蛋白的第5家族，因其氨基酸序列與西非雨林中一種灌木(Thaumatococcus daniellii)果實(shí)中含有的甜蛋白高度同源而得名。目前類(lèi)甜蛋白在昆蟲(chóng)、真菌、植物等廣泛生物體中發(fā)現(xiàn)。類(lèi)甜蛋白是一組富含半胱氨酸的蛋白質(zhì)，具有高度穩(wěn)定性。近年來(lái)，由于其抗真菌以及類(lèi)脂聯(lián)素活性成為人們研究的熱點(diǎn)。permatin蛋白是莜麥中分離到的一種屬于病程相關(guān)蛋白家族5的蛋白。
　　本文將莜麥中分離到的編碼 perm

2、atin蛋白基因在原核中進(jìn)行重組表達(dá)與純化。將 permatin基因分別與編碼促溶性標(biāo)簽蛋白、周質(zhì)表達(dá)信號(hào)肽等基因融合，最終揭示只有與 NusA標(biāo)簽蛋白的融合表達(dá)才可實(shí)現(xiàn) permatin蛋白原核可溶性表達(dá)。
　　利用木霉、尖孢鐮刀菌、酵母探究 permatin蛋白的抑菌機(jī)理。通過(guò)帶毒平板法分別測(cè)定了 permatin蛋白對(duì)木霉和尖孢鐮刀菌的半抑制濃度；接著利用Delta vision顯微鏡觀察了蛋白對(duì)木霉孢子萌發(fā)及菌絲生長(zhǎng)的影響

3、，并對(duì)孢子萌發(fā)的影響進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；進(jìn)一步結(jié)合碘化丙啶染色探究蛋白對(duì)真菌菌絲及孢子通透性以及活性氧含量的影響。結(jié)果顯示 permatin蛋白對(duì)木霉和尖孢鐮刀菌半抑制濃度分別為0.73μM，21.42μM；能夠顯著的抑制木霉孢子的萌發(fā)及菌絲的生長(zhǎng)，增加真菌菌絲及孢子細(xì)胞膜的通透性，導(dǎo)致尖孢鐮刀菌菌絲內(nèi)活性氧的集聚。采用釀酒酵母為實(shí)驗(yàn)材料通過(guò)液體懸浮培養(yǎng)法，繪制不同處理組生長(zhǎng)曲線法，結(jié)合核酸染料DAPI及熒光顯微鏡觀察法，利用DCFH-DA（2'