固相萃取高效液相色譜紫外檢測(cè)法測(cè)定血清中結(jié)合型膽汁酸的方法研究與臨床應(yīng)用.pdf

1、目的： 1.建立一種同時(shí)測(cè)定血清中9種結(jié)合型膽汁酸的固相萃取高效液相色譜紫外檢測(cè)法（SPE-HPLC-UV）。 2.用SPE-HPLC-UV法測(cè)定正常孕婦、輕度和重度妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥（ICP）患者母血和臍血中各結(jié)合膽汁酸的濃度，建立ICP的特征膽汁酸譜用于ICP的診斷和分度，初步探討ICP患者母體-胎兒的膽汁酸平衡變化。 方法： 1.用Chromabond C18 ec固相萃取柱萃取血清樣品。

2、2.色譜條件：色譜柱：Waters Nova C18色譜柱（3.9×150 mm，5μm）；柱溫：25℃；流速：0.8 ml/min；流動(dòng)相A：60μmol/L磷酸鹽緩沖液（pH3.3），流動(dòng)相B為純甲醇（A：B=34：66，v/v）；檢測(cè)波長197 nm；進(jìn)樣量20μl，檢測(cè)時(shí)間20 min。 3.用SPE_HPLC-UV法測(cè)定16例正常孕婦、11例輕度和14例重度ICP患者母血及臍血結(jié)合型膽汁酸。 結(jié)果： 1

3、.9種結(jié)合型膽汁酸在20分鐘內(nèi)分離完全，各膽汁酸在濃度為5～500μmol/L范圍內(nèi)線性良好，r為0.9993～0.9998，具有良好的相關(guān)性；最低檢測(cè)限為1.25～3.13μmol/L；該方法日內(nèi)變異系數(shù)在1.47％～5.95％之間，日間變異系數(shù)在1.61％～7.92％之間，平均回收率在83.11％～101.34％之間。 2.母血：與正常孕婦組的相比：輕度ICP組TCA、TCDCA、TDCA增高有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；重度ICP組TCA

4、、GCA、GLCA、TCDCA和TDCA增高且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與輕度ICP組相比：重度ICP組TCA、GCA、GLCA、TDCA增高有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 臍血：與正常孕婦組相比：重度ICP組TCA、GCA和TDCA增高且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與輕度ICP組相比：重度ICP組TCA、GCA、TDCA增高有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。輕度ICP組的膽汁酸譜與正常孕婦組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論： 1.本研究建立的血清膽汁酸的SPE-HPLC-UV分析

5、法能實(shí)現(xiàn)母血與臍血中結(jié)合型膽汁酸的測(cè)定，該方法準(zhǔn)確、靈敏、快速、特異，適用于實(shí)驗(yàn)室研究和臨床常規(guī)檢測(cè)。 2.本研究建立了輕度和重度ICP患者母血與臍血中的特征膽汁酸譜，該膽汁酸譜有助于ICP的診斷和分度。 3.本研究發(fā)現(xiàn)正常孕婦、輕度和重度ICP母血與臍血中膽汁酸水平成正相關(guān)，但正常孕婦臍血中總膽汁酸及TCA、GCA含量高于母血，而ICP患者母血中總膽汁酸及TCA含量卻高于臍血。這些現(xiàn)象可能是由于胎盤對(duì)膽汁酸的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制發(fā)