高效液相色譜-熒光檢測法測定血漿中幾種藥物的方法研究.pdf

1、高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是70年代迅速發(fā)展起來的一項(xiàng)高效、快速的分離分析技術(shù),是現(xiàn)代分離測試的重要手段。鑒于其簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確的特點(diǎn),目前,在醫(yī)藥、衛(wèi)生、食品、環(huán)保等各個(gè)領(lǐng)域已得到廣泛應(yīng)用。
　　 本文建立了高效液相色譜法研究血漿中妥布霉素、鹽酸金剛烷胺及連翹苷的含量測定的新方法。論文包含兩個(gè)部分。第一部分是綜述,在這部分中簡單概述了高效液相色

2、譜的特點(diǎn)、色譜技術(shù)方面的進(jìn)展、藥物代謝動(dòng)力學(xué)及其應(yīng)用、高效液相色譜-熒光檢測技術(shù)在血漿中藥物分析的應(yīng)用。第二部分是研究報(bào)告,在這部分中建立了血漿中妥布霉素、鹽酸金剛烷胺的測定以及研究了這兩種藥物在體內(nèi)動(dòng)力學(xué)的方法和血漿中連翹苷的測定的新方法,主要包括:高效液相色譜測定大鼠血漿中的妥布霉素及藥代動(dòng)力學(xué)研究;熒光衍生化高效液相色譜測定大鼠血漿中的鹽酸金剛烷胺;高效液相色譜-熒光檢測法定量測定人血漿中的連翹苷。
　　 本論文共分為四章

3、。
　　 第一章緒論
　　 緒論在簡單介紹高效液相色譜法的特點(diǎn)、色譜技術(shù)方面的進(jìn)展的基礎(chǔ)上評述了高效液相色譜的研究進(jìn)展。同時(shí)簡述了藥代動(dòng)力學(xué)及其應(yīng)用、高效液相色譜-熒光檢測法在血漿中藥物分析的應(yīng)用。
　　 第二章高效液相色譜測定大鼠血漿中的妥布霉素及藥代動(dòng)力學(xué)研究
　　 建立了一種簡單的測定靜脈注射妥布霉素后大鼠血漿中濃度的動(dòng)態(tài)變化及藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的反相高效液相色譜法。以奈替米星為內(nèi)標(biāo),用乙腈沉淀蛋白質(zhì)的方法

4、處理血漿。處理后的血漿樣品用氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)為衍生試劑,在pH為6.5、室溫條件下反應(yīng)15 min后,用Phenomenex Gemini5μC18(150×4.6 mm,5μm)柱進(jìn)行分離:流動(dòng)相為乙腈-水(94:6,V/V),流速為1.0 mL/min:熒光激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為265,315 nm。方法的線性范圍為0.12～10.48μmL(R=0.9997),檢測限(S/N=3,進(jìn)樣量為20μL)為0.074μg

5、/mL,日內(nèi)、日間RSD均小于6.00％,回收率為90.17％～103.40％,反應(yīng)溶液中的衍生產(chǎn)物在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。本方法簡便、快速、靈敏,為妥布霉素在大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的研究提供了可靠的生物分析手段。
　　 第三章熒光衍生化高效液相色譜測定大鼠血漿中的鹽酸金剛烷胺
　　 建立了一種簡單、有效的測定血漿中鹽酸金剛烷胺的高效液相色譜熒光檢測方法,并研究了該藥物在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征。采用乙腈沉淀蛋白質(zhì)處理血漿樣

6、品,并以新霉素為內(nèi)標(biāo)物,氯甲酸芴甲酯(FMOC-Cl)為衍生試劑衍生后,產(chǎn)物在Gemini-C18 column(150×4.6mm,5μm,Phenomenex,CA,LISA)上分離,流動(dòng)相為乙腈-水(體積比為90:10),流速為1.0mL/min,柱溫為25℃,熒光激發(fā)和發(fā)射波長分別為265 nm和315nm。血漿中鹽酸金剛烷胺的線性范圍為0.038～2.43μg/mL,相關(guān)系數(shù)為0.9997;最低檢測限(S/N=3)為0.022

7、μg/mL;回收率范圍為93.17～104.47％:日內(nèi)、日間RSD均低于6.00％。該檢測方法簡單、快速、有效、避免了繁瑣的液液提取過程,適用于血漿中鹽酸金剛烷胺的測定,并且成功運(yùn)用于鹽酸金剛烷胺在大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的研究。
　　 第四章高效液相色譜-熒光檢測法測定人血漿中的連翹苷
　　 建立了一種簡便、靈敏有效的反相高效液相色譜法測定人血漿中的連翹苷。血漿樣品經(jīng)乙酸乙酯提取后,在Gemini-C18 column(1

8、50×4.6 mm,5μm,Phenomenex,CA,USA)上進(jìn)行分離,流動(dòng)相為甲醇-水(50:50,V/V,pH2.9),流速為0.8 mL/min,柱溫為35℃,熒光激發(fā)和發(fā)射波長分別為277 am和315 am。血漿中連翹苷的線性范圍為0.0313～8.0μg/mL(R≥0.999);檢測限(S/N=3,進(jìn)樣量為20μL)為6.31 ng/mL;血漿中連翹苷的平均回收率為101.02％;日內(nèi)、日間RSD均小于10.00％。實(shí)驗(yàn)