大鼠腎臟缺血再灌注損傷VEGF、RhoA變化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 1、觀察缺血再灌注損傷（ischemia reperfusion injury，IRI）對大鼠腎臟組織形態(tài)、腎功能的影響。2、檢測IRI后不同時段血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）在血清中的濃度及在腎臟組織的表達(dá)，探討VEGF在大鼠腎臟IRI中的作用。3、檢測腎組織中RhoA蛋白表達(dá)的變化，通過Rho激酶抑制劑——鹽酸法舒地爾（Fasudil）預(yù)處理探討Rh

2、oA/Rho激酶信號系統(tǒng)是否介導(dǎo)VEGF引起的腎血管通透性改變。 方法: 建立大鼠腎臟缺血再灌注（IRI）動物模型，光學(xué)顯微鏡觀察腎組織學(xué)變化；檢測血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平以反映腎功能損害的程度；采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法和免疫組化二步法檢測IRI術(shù)后不同時間段血、腎組織VGEF的表達(dá)水平；采用免疫組化二步法觀察并分析RhoA蛋白在腎臟缺血再灌注過程腎組織中分布及表達(dá)。對結(jié)果進(jìn)行方差分析及

3、Pearson相關(guān)性分析。 結(jié)果: 1、對照組（Con組）腎組織形態(tài)學(xué)未見明顯異常；缺血再灌注組（IR組）腎組織出現(xiàn)明顯的組織學(xué)改變，光鏡下主要表現(xiàn)為：腎小管上皮細(xì)胞壞死、脫落，管壁完整性破壞，組織損傷以再灌注后48h最嚴(yán)重；鹽酸法舒地爾治療組（F治療組）腎小管組織形態(tài)學(xué)損傷明顯減輕，可見部分腎小管上皮細(xì)胞腫脹變性，無明顯壞死，小管基底膜破壞程度較IR組明顯減輕。 2、Con組各時相血清Scr、BUN水平較低，各

4、時相之間無明顯差異（P>0．05）；IR組Scr、BUN水平于再灌注后6h開始升高（115．12±12．87umol/L、18．41±2．29mol/L），48h達(dá)到峰值（296．1l±12．96 umol/L、50．42±5．66mol/L），72h后下降為（228．32±34．89 umol/L、26．37±3．32mol/L），各時相與Con組相比差異均有顯著性（P<0．01）；F治療組Scr、BUN水平顯著低于IR組（P<0．0

5、1），與相應(yīng)時段IR組比較差異具有顯著性（P<0．01）。 3、Con組各不同時段間腎小管壞死評分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0．05）；IR組腎小管壞死評分于再灌注后6h開始升高（44．3±3．50），且隨再灌注時間延長，腎小管壞死評分逐漸增強(qiáng)，48h達(dá)高峰（148．7±5．43），72h后開始下降（122．54±3．78），各時間點(diǎn)與Con組比較差異均有顯著性（P<0．01）；F治療組再灌注后6h、12h、24h、48h、72h腎

6、小管壞死評分與相應(yīng)時段IR組比較差異具有顯著性（P<0．01），但仍明顯高于Con組（P<0．01）。 4、Con組各時相血清VEGF水平較低，各時相之間無明顯差異（P>0．05）；IR組血清VEGF水平于再灌注后6h開始升高（1837．3±107．2 umol/L），12h達(dá)到峰值（1913．8±101．8 umol/L），24h后下降至正常（1477．2±52．9umol/L），其中IR組6h、12h與Con組相比差異有顯著

7、性（P<0．01）；F治療組6h、12h血清VEGF水平顯著低于IR組（P<0．05），分別為（1596．2±76．0 umol/L），（1620．9±59．2 umol/L）。 5、VEGF蛋白在Con組腎組織微量表達(dá)，各時相之間無明顯差異（P>0．05）；IR組再灌注6h腎小管VEGF表達(dá)開始增強(qiáng)（37．7±4．68％），12h達(dá)高峰（62．84±4．86％），24h表達(dá)開始減弱（41．9±2．02％），其中IR組6h、12

8、h、24h、48h腎小管VEGF表達(dá)與相應(yīng)時段Con組對比均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．01）；F治療組6h、12h、24h、48h腎小管VEGF表達(dá)明顯減弱（19．0±1．46％），（47．9±2．01％），（31．4±1．15％），（24．8±0．93％），與IR組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．01）。 6、RhoA蛋白在Con組腎組織微量表達(dá)，各時相之間無明顯差異（P>0．05）；IR組再灌注6h腎小管RhoA表達(dá)

9、開始增強(qiáng)（35．3±4．38％），12h達(dá)高峰（59．9±4．57％），24h表達(dá)開始減弱（43．1±3．48％），其中IR組6h、12h、24h、48h腎小管RhoA表達(dá)與相應(yīng)時段Con組對比均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．01）；F治療組6h、12h、24h、48h腎小管RhoA表達(dá)明顯減弱（18．4±1．08％），（46．74±1．81％），（33．5±1．47％），（23．8±0．99％），與IR組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

10、<0．01）。 7、在IR組中，血VEGF水平與腎小管VEGF表達(dá)呈正相關(guān)（r=0．683，P<0．01）；與血Scr、BUN、腎小管壞死評分無顯著相關(guān)（r=0．243，P>0．05；r=0．236，P>0．05；r=0．094，P>0．05）。 8、在IR組中，腎小管VEGF表達(dá)與血VEGF水平、血Ser、BUN、腎小管壞死評分均呈正相關(guān)（r=0．683，P<0．01；r=0．561，P<0．01；r=0．552，P<

11、0．01；r=0．364，P<0．01）。 結(jié)論: 1．缺血60分鐘后恢復(fù)灌注，可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)大鼠腎組織學(xué)損傷，引起腎功能減退，損害最嚴(yán)重是在IRI后48小時。 2．血清VEGF水平及腎小管VEGF表達(dá)可能是IRI早期腎臟缺血缺氧的監(jiān)測指標(biāo)，并且可能是機(jī)體對缺血缺氧保護(hù)、代償?shù)慕Y(jié)果。 3．腎小管內(nèi)VEGF表達(dá)是增高的，其增高程度可以作為反映腎臟IRI嚴(yán)重程度的指標(biāo)。 4．腎缺血再灌注損傷過程中，Rho