兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化修復(fù)膝關(guān)節(jié)軟骨缺損.pdf

1、　　研究目的：運(yùn)用組織工程學(xué)技術(shù)進(jìn)行骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的提取、培養(yǎng)擴(kuò)增、誘導(dǎo)分化、關(guān)節(jié)軟骨缺損內(nèi)植入,初步探索BMSCs在軟骨修復(fù)中的作用機(jī)制及可行性。
　　研究方法：穿刺抽取2月齡新西蘭白兔骨髓,采用密度梯度離心+貼壁培養(yǎng)法分離、純化和擴(kuò)增BMSCs,檢測(cè)第三代BMSCs生長(zhǎng)曲線和貼壁率。以轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)、維生素C和地塞米松為誘導(dǎo)因子,對(duì)BMSCs進(jìn)行平面和立體軟骨方向誘導(dǎo),利用Ⅱ型膠原免疫組化和甲苯

2、胺藍(lán)異染性進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí)檢測(cè)TGF-β1和IGF-1在聯(lián)合誘導(dǎo)過(guò)程中的作用。取平面誘導(dǎo)4天的BMSCs以2×107細(xì)胞濃度與海藻酸鈉混合,經(jīng)Ca2+作用形成凝膠珠,隨機(jī)分為2組,分別應(yīng)用TGF-β1誘導(dǎo)液和TGF-β1和IGF-1誘導(dǎo)液培養(yǎng)6天。相同方法制作不含細(xì)胞的空白凝膠和含未誘導(dǎo)的BMSCs的凝膠復(fù)合體,完成植入物準(zhǔn)備。于20只兔雙側(cè)膝關(guān)節(jié)股骨內(nèi)側(cè)髁負(fù)重面制作3.5mm×8.0mm×3.0mm的軟骨缺損模型,分為4組,每組10個(gè)膝

3、,分別為空白凝膠組、未誘導(dǎo)組、TGF-β1誘導(dǎo)組和TGF-β1和IGF-1聯(lián)合作用組,分別植入相應(yīng)的細(xì)胞凝膠復(fù)合體。手術(shù)后于2、4、8、12、20周進(jìn)行取材,然后進(jìn)行相應(yīng)的組織學(xué)分析。
　　研究結(jié)果：應(yīng)用密度梯度離心法+貼壁培養(yǎng)法可以分離、純化、擴(kuò)增兔BMSCs。在TGF-β1、地塞米松和維生素C的聯(lián)合誘導(dǎo)下,兔BMSCs可以向軟骨細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化。TGF-β1和IGF-1聯(lián)合作用下可以促進(jìn)BMSCs增殖,細(xì)胞基質(zhì)分泌增多。BMSCs