nHACP-CF材料與成骨細(xì)胞體外復(fù)合培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察甲殼素纖維(CF)增強(qiáng)多孔膠原基骨組織工程支架材料(nHACP/CF)對成骨細(xì)胞的附著、生長及增殖的影響，為骨組織工程支架材料的選擇提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法: 1、大鼠成骨細(xì)胞的原代分離、培養(yǎng)和鑒定采用酶消化法進(jìn)行大鼠頭蓋骨成骨細(xì)胞的分離，差速粘附法進(jìn)行細(xì)胞純化，常規(guī)條件下進(jìn)行細(xì)胞的體外培養(yǎng)。取培養(yǎng)第3代細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞表型鑒定。鑒定內(nèi)容包括：細(xì)胞形態(tài)的觀察、堿性磷酸酶染色。 2、大鼠成骨細(xì)胞最佳接種濃度的測定

2、實(shí)驗(yàn)采用6種濃度：10×10<'5>/ml，8×10<'5>/ml，6×10<'5>/ml，4×10<'5>/ml，2×10<'5>/ml，10<'5>/ml，然后將其分別接種到85％及90％孔隙率的nHACP/CF材料上，10天后測定各濃度下的ALP活性。 3、成骨細(xì)胞在nHACP/CF材料上附著的觀察將第3代大鼠成骨細(xì)胞以測得的最佳接種濃度分別接種到兩種孔隙率的nHACP/CF材料上，2天后通過掃描電鏡來觀察成骨細(xì)胞的情況。

3、 4、nHACP/CF材料對成骨細(xì)胞生長，增殖影響的檢測將第3代大鼠成骨細(xì)胞以最佳濃度分別接種到兩種孔隙率的nHACP/CF材料上作為實(shí)驗(yàn)組，細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)作為對照組，測定不同時間成骨細(xì)胞的MTT值和ALP·活性。 結(jié)果 1、大鼠成骨細(xì)胞具有典型的成骨細(xì)胞形態(tài)，堿性磷酸酶染色陽性。 2、細(xì)胞最佳接種濃度接種濃度提高時ALP活性也逐漸提高，但當(dāng)濃度超6×10<'5>/ml時ALP活性反而下降。說明在本實(shí)驗(yàn)中該

4、濃度與nHACP/CF材料復(fù)合培養(yǎng)后成骨能力最強(qiáng)。 3、成骨細(xì)胞的早期附著細(xì)胞/材料復(fù)合培養(yǎng)2天后，細(xì)胞在兩種孔隙率的nHACP/CF上形態(tài)舒展，伸展充分，有多個細(xì)胞突起，細(xì)胞向四周伸出偽足并跨越超微孔表面像孔內(nèi)生長。 4、MTT和ALP活性細(xì)胞接種后實(shí)驗(yàn)組和對照組隨時間延長細(xì)胞活性逐漸增加，2，6，10天時各組內(nèi)相比未見顯著差異(P>0.05)，14天時實(shí)驗(yàn)組明顯高于對照組(P<0.05)，但兩個實(shí)驗(yàn)組之間無顯著差異(