體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合后異類神經(jīng)再生的蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、第一部分：大鼠脊神經(jīng)蛋白質(zhì)組研究中雙向電泳技術的建立 目的:探討雙向凝膠電泳技術在大鼠脊神經(jīng)組織蛋白質(zhì)組研究中的應用。 方法:應用高蛋白溶解度裂解液(Urea9M,CHAPS4％,Tris40mM,DTT65mM,PMSF2mM,EDTA5mM,Phamalyte0.5％)提取正常大鼠L4前根脊神經(jīng)組織蛋白，以固相pH梯度等電聚焦電泳和垂直板SDS-PAGE電泳結合的方法進行蛋白質(zhì)的分離，使用銀染和考馬斯亮藍兩種方法分別

2、對凝膠進行染色。 結論:本實驗采用的高離液劑體系的裂解液，及對第一向和第二向電泳過程中各個因素及環(huán)節(jié)的把握，是獲得大鼠脊神經(jīng)組織蛋白2DGE圖譜的關鍵。 第二部分：體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合后異類神經(jīng)與單純體神經(jīng)再生的比較蛋白質(zhì)組研究 目的:探討大鼠體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合后異類神經(jīng)再生(foreignnerveregeneration,FNR)與單純體神經(jīng)再生(somaticnerveregeneration,SNR)后

3、在蛋白質(zhì)組水平的異同，在分子水平明確再生異類神經(jīng)的性質(zhì)。 方法:建立大鼠FNR和SNR模型，手術后90天應用建立的優(yōu)化體系進行FNR和SNR總蛋白質(zhì)的分離。然后通過ImageMaster分析軟件對兩組凝膠圖譜進行分析，找出FNR組和SNR組在蛋白組水平的異同，最后通過基質(zhì)輔助激光解析離子飛行時間質(zhì)譜對篩選的蛋白點進行鑒定。 結論:體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合后再生的異類神經(jīng)纖維在分子水平可能是體神經(jīng)成分為主。由于異類神經(jīng)再生和單

4、純體神經(jīng)再生后作用的靶器官不同，在某些蛋白質(zhì)的表達量上有區(qū)別。 第三部分體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合后異類神經(jīng)再生過程的蛋白質(zhì)組研究 目的:采用蛋白質(zhì)學技術了解體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合后異類神經(jīng)再生過程中蛋白質(zhì)表達的時序性變化。 方法:通過雙向電泳和定量圖像分析對體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合后7，14，28天的異類神經(jīng)提取物進行分析。用MALDI-TOF-MS對差異表達的蛋白質(zhì)進行鑒定分析。 結論:體神經(jīng)和內(nèi)臟神經(jīng)吻合后異類