實(shí)驗(yàn)大鼠羊水栓塞與PAI-1、CPA3、ET-1的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：羊水栓塞是臨床產(chǎn)科高死亡率的疾病之一，因常表現(xiàn)為不可預(yù)料的發(fā)病，且病程發(fā)展極快，患者多迅速死亡，從而導(dǎo)致臨床醫(yī)生陷入診斷與治療的盲區(qū)。本課題擬通過使用懷孕大鼠模擬產(chǎn)婦羊水栓塞的過程，研究PAI-1、CPA3及ET-1在大鼠羊水栓塞模型制備前后羊水、血清及肺組織中的變化，探討羊水栓塞的發(fā)病機(jī)制，為臨床診斷提供參考。
　　方法：SD懷孕大鼠30只，胎齡20d，體重280g～400g，隨機(jī)分為3組，對照組（生理鹽水組）、實(shí)驗(yàn)組1（

2、羊水組）、實(shí)驗(yàn)組2（羊水-胎糞配比液組）。麻醉生效后，術(shù)前眼眶取血備用；開腹行子宮次全切除術(shù)，分離腹主動(dòng)脈用于術(shù)后取血，收集羊水、胎糞于清潔EP管中備用；按照體重分別注射生理鹽水、羊水原液、羊水-胎糞配比液，連續(xù)觀察60min后處死。取出大鼠右肺，10％甲醛溶液固定、包埋，石蠟切片行HE染色與APM特殊染色，免疫組化檢測肺組織中CK16的表達(dá)，ELISA法分析血清、羊水及羊水-胎糞配比液中PAI-1濃度，IHC檢測肺組織中CPA3、 E

3、T-1的表達(dá)。所有數(shù)據(jù)使用SPSS21.0處理，組內(nèi)進(jìn)行配對t檢驗(yàn)，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.懷孕大鼠模擬羊水栓塞模型制備過程中，對照組無異常表現(xiàn)、無死亡發(fā)生；實(shí)驗(yàn)組1在60min內(nèi)未發(fā)生死亡，羊水注入后大鼠表現(xiàn)異常，包括：呼吸急促、抽搐、鼻尖、腳掌濕冷、尾部青紫、大小便失禁等；實(shí)驗(yàn)組2異常表現(xiàn)較實(shí)驗(yàn)組1明顯且出現(xiàn)時(shí)間更早，其中有一例在60min內(nèi)死亡。
　　2.肉眼

4、觀對照組肺組織肺組織呈淡粉色，實(shí)驗(yàn)組呈深粉色。
　　3.肺組織石蠟切片HE染色示：實(shí)驗(yàn)組1及實(shí)驗(yàn)組2的大鼠肺組織均可見不同程度肺充血征象，以實(shí)驗(yàn)組2更為明顯，均伴有大量炎性細(xì)胞浸潤，肺小血管內(nèi)可見羊水成分，如疑似淡染的粘液成分和角化鱗狀上皮的細(xì)絲狀物質(zhì)，對照組未見明顯異常。
　　4.肺組織石蠟切片APM特殊染色：實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2肺中小血管內(nèi)可見呈桃紅染色的角化鱗狀上皮，鮮藍(lán)染色的粘液成分，對照組未見明顯異常。
　　5

5、. CK16IHC染色示：實(shí)驗(yàn)組1和實(shí)驗(yàn)組2在大鼠肺血管內(nèi)可見呈棕黃色、細(xì)絲狀、絨絮狀角化鱗狀上皮，對照組未見明顯異常。
　　6.大鼠血清PAI-1濃度 Elisa法檢測結(jié)果示：對照組實(shí)驗(yàn)前（876.88±57.23）ng/L，注入生理鹽水后（860.94±35.00）ng/L；實(shí)驗(yàn)組1實(shí)驗(yàn)前（860.63±63.14）ng/L，注入羊水原液后（1373.75±79.02）ng/L；實(shí)驗(yàn)組2實(shí)驗(yàn)前（873.63±56.18）ng/

6、L，注入羊水-胎糞配比液后（1509.06±37.00）ng/L。
　　7.大鼠羊水和羊水-胎糞配比液中PAI-1濃度 Elisa法檢測結(jié)果示：羊水原液中PAI-1濃度約為（945.10±74.01） ng/L，1%羊水胎糞配比液PAI-1濃度約為（1298.75±128.44）ng/L。
　　8. CPA3 IHC結(jié)果示：實(shí)驗(yàn)組大鼠肺支氣管上皮細(xì)胞、肺血管內(nèi)皮細(xì)胞、肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞胞漿呈棕黃色陽性表

7、達(dá)，且實(shí)驗(yàn)組2表達(dá)更明顯；對照組為陰性或弱陽性表達(dá)。
　　9. ET-1 IHC結(jié)果示：實(shí)驗(yàn)組肺組織肺泡壁及肺間隔、炎性細(xì)胞（中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞）、器官上皮細(xì)胞（支氣管粘膜上皮、血管內(nèi)皮）呈棕黃染色，實(shí)驗(yàn)組2更明顯；對照組為陰性或弱陽性。
　　10. CPA3、ET-1半定量檢測結(jié)果示：經(jīng)測量平均光密度值為，對照組CPA3為0.078±0.055，ET-1為0.062±0.025；實(shí)驗(yàn)組1 CPA3為0.233±0.194

8、，ET-1為0.126±0.021；實(shí)驗(yàn)組2 CPA3為0.499±0.118，ET-1為0.175±0.035。
　　結(jié)論：
　　1.經(jīng)HE染色、APM特殊染色和IHC-CK16染色證實(shí)實(shí)驗(yàn)大鼠羊水栓塞模型制備成功。
　　2.懷孕大鼠羊水栓塞后的癥狀與體征與進(jìn)入母體的羊水性狀、成分有關(guān)。
　　3.羊水中大量PAI-1大量進(jìn)入母體可能加劇了羊水栓塞時(shí)凝血-纖溶系統(tǒng)的破壞。
　　4. PAI-1、CPA3、E