乙醛脫氫酶1用于乳腺癌干細(xì)胞的檢測(cè)及其生物學(xué)特性分析.pdf

1、背景及目的：目前認(rèn)為乳腺癌可能是一種干細(xì)胞疾病，源自體內(nèi)少數(shù)具有自我更新和多向分化潛能的腫瘤干細(xì)胞。但因缺乏簡(jiǎn)單的特異性干細(xì)胞標(biāo)記物，使其研究大受限制。因此，近年來尋找乳腺癌干細(xì)胞標(biāo)記物是當(dāng)前乳腺癌干細(xì)胞研究的熱點(diǎn)。目前多數(shù)研究認(rèn)為CD44+/CD24-/low表型是乳腺癌干細(xì)胞的特異性表面標(biāo)記物，而乙醛脫氫酶1（ALDH1）活性是一通用的干細(xì)胞功能性標(biāo)記物。本研究的目的即是探討ALDH1用于分選鑒定乳腺癌干細(xì)胞的可行性，分析ALDH1

2、+和CD44+/CD24-/low兩群乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)特性，著重分析這兩種細(xì)胞亞群之間的差異和是否存在交叉重疊現(xiàn)象，以及研究ALDH1+CD44+/CD24-/low群細(xì)胞的干細(xì)胞特性，并對(duì)乳腺癌組織及其對(duì)應(yīng)的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶中ALDH1蛋白的表達(dá)是否發(fā)生變化進(jìn)行分析。
　　方法：1.通過流式分選技術(shù)，從新鮮乳腺癌組織原代培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞中分選CD44+/CD24-/low、ALDH1+和ALDH1+CD44+/CD24-/low細(xì)胞亞群

3、，分析各分選細(xì)胞占總腫瘤細(xì)胞的比例；2.通過克隆形成、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、transwell、免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察各組細(xì)胞的自我更新、增殖和侵襲能力；3.通過裸鼠致瘤試驗(yàn)觀察各組細(xì)胞的致瘤能力。4.應(yīng)用免疫組化的方法，回顧性分析87例乳腺癌標(biāo)本中ALDH1蛋白的表達(dá)，并分析與對(duì)應(yīng)的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶中，ALDH1蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：對(duì)原代培養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行流式分選后發(fā)現(xiàn)，CD44+/CD24-/low細(xì)胞占總細(xì)胞比例為7.2％；ALDH1+

4、細(xì)胞的比例為4.6％；ALDH1+CD44+/CD24-/low細(xì)胞占比為1.5％。三組細(xì)胞均具有干細(xì)胞特性，其自我更新、增殖、侵襲及致瘤能力由強(qiáng)至弱依次為ALDH1+CD44+/CD24-/low、ALDH1+細(xì)胞、CD44+/CD24-/low細(xì)胞。ALDH1蛋白在原發(fā)乳腺癌標(biāo)本中的表達(dá)比例為28.7％，在對(duì)應(yīng)的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)的比例為43.7％,有顯著性差異。
　　結(jié)論：1.乳腺癌中存在CD44+/CD24-/low、ALD

5、H1+和ALDH1+CD44+/CD24-/low細(xì)胞亞群，均具有自我更新、高增殖、侵襲及致瘤能力，但ALDH1+CD44+/CD24-/low細(xì)胞亞群的自我更新、增殖、侵襲及致瘤能力最強(qiáng)，證明此群細(xì)胞具有更強(qiáng)的干細(xì)胞特性，ALDH1可作為可靠的乳腺癌干細(xì)胞標(biāo)志物用于乳腺癌干細(xì)胞的檢測(cè)。聯(lián)合運(yùn)用CD44+/CD24-/low和ALDH1可更特異性的鑒定、分選乳腺癌干細(xì)胞。2.乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶中乙醛脫氫酶1的表達(dá)率明顯高于對(duì)應(yīng)的原發(fā)灶，提