脆性基因FHIT與WWOX在乳腺癌中表達的研究.pdf

1、乳腺癌發(fā)病率占女性惡性腫瘤的首位，且以1％的速度逐年升高。乳腺癌發(fā)生及侵襲轉(zhuǎn)移的機制成為國內(nèi)外研究熱點。隨著對乳腺癌生物學行為的深入了解，人們已經(jīng)認識到乳腺癌的發(fā)生發(fā)展均源自基因水平的改變。近年研究認為，DNA損傷是惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機制，染色體脆性位點抑癌基因?qū)NA損傷高度敏感。 FHIT基因是1996年Ohta<'[1]>等以外顯子捕獲法(exon trapping experiment)在染色體3 P 1 4.2

2、區(qū)定位的一個基因，屬于組氨酸三聯(lián)體(histindine triad，HIT)基因家族。因易于斷裂，故命名為脆性三聯(lián)組氨酸基因(FHIT)，在染色體上占據(jù)1 Mb大小的位置，覆蓋FRA3B脆性位點。FRA3B脆性位點是最先發(fā)現(xiàn)的較活躍的脆性位點。wwox基因是2000年由Bednarek<'[2]>等應用鳥槍基因測序技術對相應的轉(zhuǎn)錄子進行分析而分離鑒定出的一個新基因，它位于染色體16q23.3-24.1區(qū)域，并跨越常見染色體脆性位點FR

3、Al6D。FRAl6D是第二個發(fā)現(xiàn)的較活躍的脆性位點，其覆蓋的DNA序列長約2.0Mb，WWOX基因長約1.0Mb。 FHIT基因和WWOX基因作為較早確定且與脆性位點相聯(lián)系的抑癌基因，在抑癌基因家族中地位舉足輕重。大量文獻證實FHIT基因和WWOX基因與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關，與腫瘤的預后密切相關。本文旨在探討： 1、FHIT基因和WWOX基因在人乳腺癌組織中的表達特點及其表達水平的變化與乳腺癌臨床、病理等因素的關

4、系，從而為乳腺癌的診斷、預后判斷及治療方案選擇提供理論依據(jù)。 2、觀察分析不同乳腺癌細胞系中FHIT及WWOXmRNA表達與腫瘤生物學行第一部分：FHIT與WWOX基因的mRNA在乳腺癌中的表達及其臨床意義 目的 觀察乳腺癌組織中FHIT與WWOX基因的mRNA表達情況，并探討其與臨床病理學指標的關系。 方法：以逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測5l例乳腺癌及癌旁組織標本中染色體脆性位點抑癌基因FH

5、IT與WWOXI的mRNA表達，半定量分析電泳結(jié)果。以免疫組化法檢測乳腺癌石蠟標本中的雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和HER-2基因狀態(tài)。 結(jié)果：51例配對標本中，WWOX基因的mRNA表達在乳腺癌組織及癌旁非癌乳腺組織中差異有顯著性(P<0.01)；FHIT基因的mRNA表達在乳腺癌組織及癌旁非癌乳腺組織中差異有顯著性(P<0.01)。FHIT與WWOXmRNA在腺癌組織中的表達呈正相關(r<,s>=0.306，P<0

6、.05)，F(xiàn)HIT與WWOXmRNA在乳腺癌組織中的低表達亦呈正相關(r<,s>=0.354，P<0.05)。FHIT與WWOX mRNA的表達與臨床病理分期有關(P<0.05)，WWOX mRNA的表達與腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(P<0.05)。 結(jié)論FHIT與WWOX基因系重要的候選抑瘤基因，與其他預后指標的聯(lián)合檢測可望對患者的治療預后作出更準確的預測。第二部分：不同乳腺癌細胞系FHIT及WWOXmRNA表達與腫瘤生物學行為的

7、關系 目的檢測FHIT基因、WWOX基因在乳腺癌MCF-7細胞株、MCF-7/Adr細胞株、MDA-MB-231細胞株及MDA-MB-435S細胞株中的表達水平，并探討其意義 方法：常規(guī)培養(yǎng)、凍存及復蘇乳腺癌MCF-7細胞株、MCF-7/Adr細胞株、MDA-MB-231細胞株及MDA-MB-435S細胞株，以逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測各細胞株中FHIT基因、WWOX基因的Mrna表達，半定量分

8、析電泳結(jié)果。結(jié)果1、MCF-7細胞中WWOXmRNA和FHITmRNA表達較高；而MCF-7/Adr細胞中WWOXmRNA和FHITmRNA表達水平較MCF-7細胞降低。 2、MDA-MB-231細胞中WWOXmRNA失表達，F(xiàn)HITmRNA弱表達；MDA-MB-435細胞WWOXmRNA和FHITmRNA均失表達； 結(jié)論1、MCF-7/Adr細胞惡性程度的增強機制可能與WWOXmRNA和FHITmRNA失表達