多殺性巴氏桿菌分型分析及其感染雞Il-1β，Il-6轉(zhuǎn)錄變化研究.pdf

1、多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida，P.multocida），能夠引起人和動物共同感染，引起禽霍亂，豬萎縮性鼻炎、豬肺疫等巴氏桿菌病。巴氏桿菌病在世界各個地區(qū)均可暴發(fā)，對家畜家禽及養(yǎng)殖業(yè)有很大的影響。多殺性巴氏桿菌有多種血清型，不同動物來源的多殺性巴氏桿菌分離株的基因組存在差異，不同毒力菌株在基因組上也存在差異。
　　本研究以國內(nèi)部分地區(qū)36株P(guān).multicida為研究對象，利用莢膜多重PCR、脂多糖多重

2、PCR方法進行分型鑒定，并通過多位點序列分型方法對菌株進行遺傳演化分析。結(jié)果顯示36株P(guān).multicida包括A，B和D3種莢膜血清型及L1，L2，L3和L64種脂多糖基因型。禽源P.multicida以莢膜A型，脂多糖L1型為主，其中禽源菌株C48-1，Pm72-4，Pm731均為莢膜A型，脂多糖L1型。多位點序列分型技術(shù)將多其分為ST129，ST8，ST58，ST5，ST13，ST50和ST122等7種ST型，禽源P.multic

3、ida主要為ST129型。
　　20只3月齡SPF雞隨機分為4組，實驗組分別感染莢膜型和脂多糖型相同的禽源多殺性巴氏桿菌菌株C48-1，50 CFU/0.1mL;Pm72-4，2×104 CFU/0.1mL; Pm731，2×109 CFU/0.1 mL各0.1mL，對照組注射0.1mL PBS。每個實驗組分別在感染后剖殺死亡雞，未死亡的雞在14d時全部剖殺，迅速取脾臟樣品用于RNA提取。采用SYBR Green染料實時熒光定景P

4、CR檢測實驗組和對照組TLR4、MyD88、IL-1β和IL-6基因mRNA相對表達量的變化，通過基因表達量變化研究感染多殺性巴氏桿菌后IL-1β和IL-6轉(zhuǎn)錄變化。結(jié)果顯示:感染菌株C48-1后5只雞全部死亡，感染Pm72-4菌株后有2只雞存活，感染Pm731菌株和注射PBS后5只雞全部存活。表明C48-1菌株對SPF雞有很強的致病性，屬于強毒株;菌株P(guān)m72-4對SPF雞有致病性，但毒力較弱;菌株P(guān)m731對SPF雞不致死，屬于弱毒

5、株。熒光定量檢測TLR4、MyD88、IL-1β和IL-6的表達量結(jié)果為，與對照組相比較強毒株C48-1感染后，TLR4、MyD88和IL-6的表達量均上調(diào)，且差異顯著，而Pm72-4和Pm731感染組與對照組相比差異不顯著;相對于對照組感染C48-1、Pm72-4和Pm731后產(chǎn)生IL-1β的量均上調(diào)，但差異均不顯著。表明感染多殺性巴氏桿菌強毒株C48-1后激活了細胞因子IL-6，但不能激活I(lǐng)L-1β，感染多殺性巴氏桿菌弱毒株P(guān)m72