2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  探討何首烏飲對衰老大鼠生精細胞凋亡的可能機制。
  方法:
  1.根據(jù)實驗要求將雄性大鼠分為四組,每組各10只:青年對照組(12月齡);自然衰老組(18月齡);何首烏飲1組(何首烏飲4.8g/100g,灌胃60d,18月齡);何首烏飲2組(何首烏飲4.8g/100g,灌胃30d,18月齡)觀察不同給藥時間藥物延緩衰老作用。
  2.應用β-半乳糖苷酶試劑盒檢測β-半乳糖苷酶在各組睪丸組織中的表達。<

2、br>  3.采用TUNEL熒光試劑盒觀察睪丸組織細胞凋亡率。
  4.采用基因芯片技術(shù)篩選睪丸組織受何首烏飲調(diào)控的差異表達基因,實時熒光定量PCR(qRT-PCR)驗證芯片結(jié)果。
  5.選出與細胞凋亡相關(guān)的差異表達基因,從中選取關(guān)鍵基因Caspase-3、DR6、BAX、14-3-3σ,采用qRT-PCR檢測在mRNA水平的改變;同時進行免疫熒光和Western blot觀察以上蛋白和Cytc在睪丸組織中的表達。

3、  結(jié)果:
  1.β-半乳糖苷酶表達β-半乳糖苷酶陽性產(chǎn)物呈藍色定位在細胞質(zhì)。青年對照組藍色細胞較少,且主要分布在間質(zhì)細胞;自然衰老組衰老細胞明顯增多且藍染細胞主要是精原細胞和間質(zhì)細胞,β-半乳糖苷酶的陽性率明顯高于青年對照組(P<0.01);何首烏飲用藥組發(fā)生衰老的細胞主要是間質(zhì)細胞,β-半乳糖苷酶的表達比自然衰老組明顯減少(P<0.01);用藥組之間比較何首烏飲1組β-半乳糖苷酶的表達明顯低于何首烏飲2組(P<0.01)。<

4、br>  2.TUNEL檢測睪丸組織凋亡結(jié)果細胞核呈綠色熒光為凋亡細胞。青年對照組細胞凋亡較少,主要分布在間質(zhì)細胞;自然衰老組凋亡陽性信號分布于各級生精細胞,偶見間質(zhì)細胞,細胞凋亡率顯著高于青年對照組(P<0.01);何首烏飲用藥組凋亡細胞主要是精原細胞和間質(zhì)細胞,與自然衰老組比較凋亡細胞明顯減少(P<0.01);且何首烏飲1組細胞凋亡率明顯低于何首烏飲2組(P<0.01)。
  3.基因芯片篩選結(jié)果基因芯片共篩選出21260個基

5、因,受何首烏飲直接調(diào)控的基因有912個,其中衰老后691個基因表達明顯上調(diào),221個基因表達下調(diào),用何首烏飲干預60d后,上調(diào)的691個基因明顯下調(diào),下調(diào)的221個基因明顯上調(diào)。通過Pathway分析受何首烏飲調(diào)控的與細胞周期調(diào)控和凋亡相關(guān)的通路共有13條。
  4.qRT-PCR驗證芯片結(jié)果我們選擇了9個基因進行驗證,其中AK1,Glrx3,Cabin1,Kdm2b衰老后表達下調(diào),何首烏飲用藥后表達上調(diào);Ccng1,GHR,Ca

6、pn8,ADAM5,Cybrd1衰老后表達上調(diào),何首烏飲用藥后表達下調(diào)。qRT-PCR結(jié)果與芯片結(jié)果一致,說明芯片結(jié)果可信。
  5.qRT-PCR檢測Caspase-3、DR6、BAX、14-3-3σ在mRNA水平的改變與青年對照組相比,自然衰老組Caspase-3、DR6、BAX的表達明顯上調(diào)(P<0.01),14-3-3σ的表達明顯下調(diào)(P<0.01);何首烏飲1組Caspase-3、DR6、BAX的表達比自然衰老組有所下調(diào)

7、(P<0.01),14-3-3σ的表達明顯上調(diào)(P<0.01);何首烏飲2組Caspase-3、DR6的表達比自然衰老組有所下調(diào)(P<0.01),14-3-3σ的表達無顯著性差異(P>0.05);且Caspase-3、DR6在兩個用藥組之間無顯著性差異(P>0.05)。
  6.免疫熒光和Western blot檢測結(jié)果 Caspase-3、Cytc、14-3-3σ陽性產(chǎn)物呈紅色顆粒,Caspase-3定位于各級生精細胞的胞核或胞

8、質(zhì),Cytc、14-3-3σ表達在各級生精細胞和間質(zhì)細胞的胞質(zhì)中。BAX陽性產(chǎn)物呈紅色顆粒,DR6陽性產(chǎn)物呈綠色顆粒,二者主要表達在間質(zhì)細胞和精原細胞的胞質(zhì)。Western blot檢測結(jié)果顯示與青年對照組相比,自然衰老組Caspase-3、Cytc、BAX、DR6表達明顯增加(P<0.01),14-3-3σ表達明顯減少(P<0.01);何首烏飲用藥組與自然衰老組大鼠比較Caspase-3、Cytc、BAX、DR6表達量明顯減少(P<0

9、.01),14-3-3σ表達量明顯增加(P<0.01);用藥組間相比,何首烏飲1組14-3-3σ表達量明顯高于何首烏飲2組(P<0.01),何首烏飲1組BAX、Caspase-3、DR6、Cytc表達量明顯低于何首烏飲2組(P<0.01或P<0.05)。
  結(jié)論:
  1.何首烏飲能夠降低衰老標志物β-半乳糖苷酶的表達。
  2.何首烏飲可以明顯減少自然衰老大鼠睪丸生精細胞的凋亡。
  3.在睪丸組織中受何首烏

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