蘇拉明單獨(dú)及聯(lián)合順鉑對(duì)骨肉瘤細(xì)胞MG-63增殖的抑制作用.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文蘇拉明單獨(dú)及聯(lián)合順鉑對(duì)骨肉瘤細(xì)胞MG63增殖的抑制作用姓名：章淼鋒申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)（骨科）指導(dǎo)教師：楊迪生200405012004浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文MTT(Sigma公司)MEM培養(yǎng)基(Gibcol公司)DMSO(Sigma公司)胎牛血清(杭州四季清生物制品廠)細(xì)胞培養(yǎng)箱(Heraeus)倒置顯微鏡(OLympus)熒光顯微鏡(Axiovert)全自動(dòng)酶標(biāo)儀(OpsysMRDYNEX)移液器(Eppe

2、ndorf)96孔板(Biochemicals)二、實(shí)驗(yàn)方法。1、將人骨肉瘤細(xì)胞惦一63常規(guī)培養(yǎng)于含體積分?jǐn)?shù)lo％胎牛血清(56。C水浴滅活30min)的MEM培養(yǎng)基中，其中含100U／ml青霉素和100U／ml鏈霉素，在37。c、5％C0。、95％空氣以及飽和濕度的條件下，在C0：孵箱內(nèi)培養(yǎng)。用025％胰酶002％EDTA消化貼壁的骨肉瘤細(xì)胞，傳代培養(yǎng)48小時(shí)后取處于指數(shù)增殖期的細(xì)胞消化備用。2、將細(xì)胞用培養(yǎng)液調(diào)成一定濃度后接種于96

3、孔板上，每孔加100ul細(xì)胞懸液(細(xì)胞濃度為li05／rill)，孵箱內(nèi)培養(yǎng)24h后細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，鋪壁約60％左右。次日加100ul含藥物的MEM培養(yǎng)基，陰性對(duì)照組加i00ul培養(yǎng)基；順鉑組藥物終濃度為5、25、125、0625ug／ml：蘇拉明組藥物終濃度為400、200、100、50llg／m1。聯(lián)合化療組加入順鉑和蘇拉明后使藥物最終濃度為順鉑25斗g／ml蘇拉明200ug／ml、順鉑L25#g／ml蘇拉明200llg／Ⅲl、順鉑2

4、5Iig／ml蘇拉明100pg／ml、順鉑12511g／ml蘇拉明100ug／ml。每個(gè)濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)48h作~r訂細(xì)胞毒性檢測(cè)。3、在35ml玻璃培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)接種細(xì)胞5ml(細(xì)胞濃度為li05／m1)，次日細(xì)胞鋪壁約60“6，倒去原培養(yǎng)液后加入含藥物蘇拉明的培養(yǎng)液5ml，并且使藥物最終濃度為200斗g／ml、100ng／ml，繼續(xù)在孵箱內(nèi)培養(yǎng)72小時(shí)后于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSSl10統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)