抵抗素對小鼠靜脈血栓形成的影響及血管內(nèi)皮功能的調(diào)節(jié).pdf

1、背景及目的:
　　近年來以中心性肥胖、胰島素抵抗為主要特征的代謝綜合征(metabolic syndrome,MetS)發(fā)病率逐年升高。代謝綜合征患者易處于血栓前狀態(tài),增加動(dòng)靜脈血栓性疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),但發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。抵抗素(resistin,RE)是肥胖與胰島素抵抗的重要中間環(huán)節(jié),具有促炎癥作用。本課題組前期臨床觀察及體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)抵抗素與影響血栓形成的凝血/纖溶因子之間,尤其是纖溶酶原激活物抑制劑-1(plasminoge

2、n activator inhibitor-1,PAI-1)呈明顯正相關(guān),這有可能是引起代謝綜合征易合并血栓性疾病并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制之一。因此在本課題前期研究結(jié)果的基礎(chǔ)上,本次實(shí)驗(yàn)將進(jìn)一步應(yīng)用飲食誘導(dǎo)肥胖鼠模型,探討內(nèi)外源性抵抗素水平對小鼠靜脈血栓形成的直接影響,同時(shí)觀察抵抗素對小鼠血管內(nèi)皮PAI-1及組織型纖溶酶原激活物(tissue plasminogen activator,tPA)的影響,揭示其致血栓形成的作用機(jī)制。
　　方

3、法:
　　飼養(yǎng)同窩出生的雄性C57BL/6小鼠(約40-50只)至鼠齡約5-6周大小,隨機(jī)分為以下兩組:正常飲食組(ND組,n=24)和高脂飲食組(HD組,n=24),分別用普通飼料(含10％脂肪)和高脂肪、高能量的飼料(含60%脂肪)喂養(yǎng)約10-12周,誘導(dǎo)產(chǎn)生肥胖伴胰島素抵抗模型,至小鼠約16-18周大小后,正常飲食組隨機(jī)分為:
　?、僬ｏ嬍硨φ战M(ND+NS組,n=12);
　?、谡ｏ嬍车挚顾亟M(ND+RE組

4、,n=12)。
　　高脂飲食組隨機(jī)分為:
　?、俑咧嬍硨φ战M(HD+NS組,n=12);
　?、诟咧嬍车挚顾亟M(HD+RE組,n=12)。
　　對照組給予腹腔注射0.9%生理鹽水連續(xù)2周,抵抗素組給予腹腔注射重組抵抗素(33.33μg/kg/d)連續(xù)2周。實(shí)驗(yàn)測量指標(biāo)如下:
　　(1)測量各組小鼠體重、空腹血糖值;
　　(2)應(yīng)用下腔靜脈結(jié)扎法誘導(dǎo)靜脈血栓形成,測量各組小鼠血栓重量及血栓長度;

5、r>　　(3)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)測定不同組別實(shí)驗(yàn)前后血漿抵抗素蛋白水平;
　　(4)剪取升主動(dòng)脈至腹主動(dòng)脈遠(yuǎn)端,分離提取總RNA,應(yīng)用real time RT-PCR法測定不同組別的血管PAI-1及t-PA的mRNA含量。
　　結(jié)果:
　　(1)高脂飲食組小鼠體重較正常飲食組小鼠體重明顯升高(p<0.05);高脂飲食組血糖較正常飲食組

6、血糖顯著升高(p<0.01)。提示高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖伴胰島素抵抗模型造模成功。
　　(2)高脂飲食組血漿抵抗素水平較正常飲食組升高,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),提示飲食所致高抵抗素血癥。抵抗素組給予注射抵抗素后,血漿抵抗素水平較前顯著升高,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),提示藥物所致高抵抗素血癥。
　　(3)高脂飲食組靜脈血栓重量及血栓長度均較正常飲食組顯著升高(p<0.01);抵抗素組靜脈血栓重量及血栓長度均較

7、對照組明顯升高(p<0.01)。
　　(4)高脂飲食組血管內(nèi)皮PAI-1mRNA的表達(dá)較正常飲食組顯著升高(p<0.01);抵抗素組血管內(nèi)皮PAI-1mRNA的表達(dá)較對照組顯著升高(p<0.01)。
　　(5)高脂飲食組的tPAmRNA表達(dá)較普通飲食組降低(p<0.05);抵抗素組tPAmRNA表達(dá)與對照組之間差別無明顯變化(p>0.05)。
　　結(jié)論:
　　高抵抗素水平可增加小鼠深靜脈血栓重量及血栓長度,高抵抗