DDR2對缺氧誘導的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞HIF-1α和VEGF表達的影響.pdf

1、【研究背景】盤狀結構域受體2（DDR2）是一類受體型蛋白酪氨酸激酶（RTKS），DDR2通過與細胞外基質（ECM）相互作用參與了多種細胞的遷移，粘附，分化，轉移，并在腫瘤、自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。DDR2被膠原激活后，可誘導受體發(fā)生自磷酸化，隨后介導眾多信號傳導途徑，調控細胞的生物學行為。脈絡膜新生血管是眼內新生血管的重要表現(xiàn)形式之一，與眼部多種疾病有關，是造成致盲的主要原因之一，目前尚無有效的治療方法，有關其發(fā)生機制

2、的研究，尋找針對CNV病因，抑制新生血管生成的有效療法，將為未來治療CNV提供可能。目前關于DDR2是否參與了脈絡膜新生血管發(fā)生發(fā)展尚不明確。本實驗探討DDR2在CNV發(fā)生中的作用。
　　【目的】觀察缺氧狀態(tài)下人RPE細胞中DDR2表達以及激活或是抑制狀態(tài)的DDR2對人RPE細胞中缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）活化和血管內皮生長因子（VEGF）表達的影響，探討DDR2在CNV發(fā)生中的作用。
　　【方法】運用200μmol

3、/L CoCl2處理RPE細胞建立化學缺氧模型，于缺氧后0，2，6，12，24h用免疫熒光，逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR），實時熒光定量分析法（Q-PCR）和免疫蛋白印跡法(Western blot)檢測RPE細胞中 DDR2的表達。缺氧條件下以Ⅰ型膠原（10μg／ml，35℃孵箱內孵育）刺激，分別于作用后0，2，6，12，24hRT-PCR，Q-PCR和Western blot檢測RPE細胞中HIF-1α，RT-PCR和酶聯(lián)免疫吸

4、附試驗（ELISA）法觀察 RPE細胞培養(yǎng)上清中 VEGF表達，缺氧條件下給 RPE細胞轉染siRNADDR2后分別于作用后0，2，6，12，24hRT-PCR，Q-PCR和Western blot檢測 RPE細胞中 HIF-1α的表達，RT-PCR和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法觀察RPE細胞培養(yǎng)上清中VEGF表達。
　　【結果】正常RPE細胞細胞核，胞質，胞膜上有微弱的DDR2熒光表達，隨著缺氧時間延長DDR2表達減弱；缺氧