基于代謝組學(xué)的絡(luò)氣虛滯-郁滯證候病生理基礎(chǔ)及通絡(luò)干預(yù)研究.pdf

1、目的：以脈絡(luò)學(xué)說核心理論“營(yíng)衛(wèi)承制調(diào)平”和氣血相關(guān)理論為指導(dǎo)，基于3469例血管病變患者臨床調(diào)查揭示的絡(luò)氣虛滯/郁滯為“脈絡(luò)-血管系統(tǒng)病”的始動(dòng)因素并貫穿病變?nèi)^程，采用代謝組學(xué)方法探討西醫(yī)無明確診斷、但符合絡(luò)氣虛滯/郁滯證候辨證標(biāo)準(zhǔn)的亞健康人群血漿代謝物譜特征。模擬絡(luò)氣虛滯/郁滯證候表現(xiàn)建立大鼠證候模型，結(jié)合證候人群和前期證候大鼠代謝物譜變化，進(jìn)一步探討絡(luò)氣虛滯/郁滯證候大鼠血漿酰肉堿、脂類代謝輪廓變化及通絡(luò)干預(yù)作用?；谔禺愋源x物

2、譜特征，闡明絡(luò)氣虛滯/郁滯證候大鼠血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)與功能變化，同時(shí)在主動(dòng)脈、心肌、腦組織觀察與肉堿、磷脂、5-羥色氨(5-HT)代謝相關(guān)的重要細(xì)胞因子、受體表達(dá)變化，并探討通絡(luò)藥物干預(yù)作用?；谏鲜雠R床與基礎(chǔ)研究，初步揭示絡(luò)氣虛滯/郁滯證候的代謝組學(xué)特征及其對(duì)血管病變的影響與通絡(luò)干預(yù)作用，對(duì)闡明過度疲勞、情緒抑郁等社會(huì)心理行為因素在血管病變發(fā)病中的始動(dòng)作用，并尋求有效干預(yù)策略和藥物具有重要意義。
　　 方法：
　　 本研究分

3、為以下三部分內(nèi)容：
　　 1 絡(luò)氣虛滯/郁滯證候人群代謝組學(xué)研究
　　 本研究基于3469例血管病變臨床調(diào)查揭示的絡(luò)氣虛滯/郁滯為“脈絡(luò)-血管系統(tǒng)病”始動(dòng)因素并貫穿病變?nèi)^程，選取西醫(yī)臨床診斷無明顯病變，但符合“脈絡(luò)-血管系統(tǒng)病”辨證診斷標(biāo)準(zhǔn)中絡(luò)氣虛滯/郁滯證候判定標(biāo)準(zhǔn)的亞健康人群為研究對(duì)象。符合研究方案的78例受試者中，健康對(duì)照組28例，絡(luò)氣虛滯組26例，絡(luò)氣郁滯組24例，入選人群需進(jìn)行血常規(guī)、空腹血糖、血脂（總膽固醇

4、、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白）、尿常規(guī)、肝功能（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）、腎功能（血尿素氮、血肌酐）、胸透、肝膽B(tài)超、心電圖檢查。抽取空腹血制備血漿，采用超高效液相色譜聯(lián)合離子阱-飛行時(shí)間質(zhì)譜(UFLC/MS-IT-TOF)分析血漿中代謝物譜變化，經(jīng)過數(shù)據(jù)格式轉(zhuǎn)換后導(dǎo)入SIMCA-P進(jìn)行模式識(shí)別，使用正交信號(hào)校正偏最小二乘法判別分析(OSC-PLS-DA)方法對(duì)不同證候人群和健康對(duì)照人群進(jìn)行區(qū)分。
　　 2 絡(luò)氣虛滯/郁滯證候大鼠

5、血漿酰肉堿、脂類代謝輪廓及通絡(luò)干預(yù)研究
　　 依據(jù)中醫(yī)“勞則氣耗”、“郁則氣結(jié)”理論，模擬絡(luò)氣虛滯/郁滯證候辨證診斷標(biāo)準(zhǔn)中特征性臨床表現(xiàn)，采用“基礎(chǔ)飲食+負(fù)重游泳”、束縛法分別建立絡(luò)氣虛滯和絡(luò)氣虛滯證候大鼠模型，并采用一般狀態(tài)觀察、生物學(xué)表征、力竭游泳時(shí)間、尾懸掛方法進(jìn)行模型評(píng)價(jià)?；谇捌诮j(luò)氣虛滯/郁滯證候人群（脂代謝異常）和證候大鼠（肉堿代謝異常）代謝組學(xué)研究結(jié)果，選擇酰肉堿和脂類開展絡(luò)氣虛滯/郁滯證候大鼠代謝輪廓分析，分別采

6、用益氣通絡(luò)和流氣暢絡(luò)代表藥物人參（人參總皂苷）和薤白（薤白提取物）進(jìn)行干預(yù)。酰肉堿分離檢測(cè)應(yīng)用LC/MS，質(zhì)譜檢測(cè)采用正離子DynamicMRM模式；脂類分離分析在UFLC/IT-TOF MS上進(jìn)行，質(zhì)譜檢測(cè)采用ESI正/負(fù)離子模式，同時(shí)采用多變量PCA分析和單變量非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析。
　　 3 絡(luò)氣虛滯/郁滯證候大鼠血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)功能與主動(dòng)脈、心腦組織CPT-I、磷脂、5-HT受體變化及通絡(luò)干預(yù)研究
　　 將10

7、5只Wistar雄性大鼠隨機(jī)分為7組：①正常對(duì)照組，②絡(luò)氣虛滯組，③絡(luò)氣郁滯組，④絡(luò)氣虛滯+人參總皂苷組，⑤絡(luò)氣虛滯+通心絡(luò)組，⑥絡(luò)氣郁滯+薤白提取物組，⑦絡(luò)氣郁滯+通心絡(luò)組。應(yīng)用光鏡、電鏡觀察大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮結(jié)構(gòu)改變，采用放免法檢測(cè)反映血管內(nèi)皮功能的血漿內(nèi)皮素(ET-1)水平，硝酸還原酶法檢測(cè)血清一氧化氮(NO)水平。
　　 圍繞絡(luò)氣虛滯/郁滯證候代謝組學(xué)、代謝輪廓中潛在生物學(xué)標(biāo)記物，在大鼠主動(dòng)脈、心肌、腦組織血管病變主要病變組

8、織中深入開展與肉堿、磷脂、5-HT代謝相關(guān)的重要細(xì)胞因子、受體表達(dá)研究，并探討通絡(luò)藥物的干預(yù)作用。在肉堿相關(guān)研究中，采用高效液相檢測(cè)心肌能量負(fù)荷，實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測(cè)主動(dòng)脈、心肌組織中介導(dǎo)能量代謝過程中線粒體脂肪酸β氧化過程限速反應(yīng)的肉堿棕櫚酸轉(zhuǎn)移酶-I(CPTI)mRNA表達(dá)，同時(shí)觀察調(diào)控CPT-I的AMP激活的蛋白激酶亞基(AMPKa)、過氧化物酶體增殖物激活受體6(PPARδ)mRNA表達(dá)，Western

9、blot檢測(cè)主動(dòng)脈、心肌組織CPT-I、AMPKa亞基、磷酸化AMPKa亞基、PPAR8蛋白水平。在磷脂相關(guān)研究中，采用ELISA方法檢測(cè)主動(dòng)脈調(diào)控磷脂中溶血磷脂酰膽堿（LPC，ox-LDL的主要活性成分）生成的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2(Lp-PLA2)含量，RT-PCR和Western blot檢測(cè)主動(dòng)脈4型G蛋白偶聯(lián)受體(GPR4)mRNA和蛋白表達(dá)。在5-HT相關(guān)研究中，采用ELISA方法檢測(cè)腦組織5-HT水平，RT-PCR檢測(cè)主動(dòng)脈

10、5-HT1D受體、5-HT2A受體mRNA與腦組織5-HT1D受體、5-HT2A受體、色氨酸羥化酶(TPH)mRNA表達(dá)，Western blot檢測(cè)主動(dòng)脈、腦組織5-HT1D受體、5-HT2A受體蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1 絡(luò)氣虛滯/郁滯證候人群代謝組學(xué)研究
　　 納入的亞健康受試者各項(xiàng)理化檢查均在正常范圍內(nèi)，血漿代謝組學(xué)分析顯示：絡(luò)氣虛滯/郁滯證候人群與健康對(duì)照人群均得到區(qū)分，與健康人群比較，絡(luò)氣虛滯

11、證候人群苯丙氨酸、色氨酸（5-HT的前體）均有上升趨勢(shì)（P＞0.05），LPCC17:2、LPCC18:2顯著降低(P＜0.05，0.01)，LPCC16:1、LPCC16:0、LPCC18:1、LPCC18:0均有降低趨勢(shì)(P＞0.05)。
　　 與健康對(duì)照人群比較，絡(luò)氣郁滯證候人群苯丙氨酸、亮氨酸、色氨酸及膽紅素顯著增加（P＜0.05，0.01），乙酰肉堿（與脂肪酸β氧化供給能量有關(guān)）有升高趨勢(shì)(P＞0.05)，LPCC16

12、:0、LPCC16:1、LPCC17:2、LPCC18:0、LPCC18:1、LPCC18:2顯著降低（P＜0.05，0.01）。
　　 基于三組人群血漿代謝譜的OSC-PLS-DA模型顯示，三組人群基本得到區(qū)分，與健康對(duì)照組比較，絡(luò)氣郁滯證候人群體內(nèi)重要代謝物比絡(luò)氣虛滯證候人群變化顯著。絡(luò)氣郁滯組苯丙氨酸、亮氨酸、色氨酸及膽紅素顯著增加(P＜0.05，0.01)，LPCC16:0、LPCC18:0、LPCC18:1、LPCC1

13、8:2顯著降低(P＜0.05，0.01)；絡(luò)氣虛滯組LPCC18:2顯著降低（P＜0.05）。
　　 2 絡(luò)氣虛滯/郁滯證候大鼠血漿酰肉堿、脂類代謝輪廓及通絡(luò)干預(yù)研究
　　 2.1絡(luò)氣虛滯/郁滯證候大鼠模型建立
　　 與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣虛滯組大鼠表現(xiàn)出倦怠懶惰，精神萎靡，行動(dòng)遲緩甚則無力完成翻正反射，符合絡(luò)氣虛滯證候臨床表現(xiàn)；絡(luò)氣郁滯組大鼠造模初期表現(xiàn)為打斗、撕咬、尖叫等情緒過激行為，但隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，動(dòng)

14、物表現(xiàn)為精神萎靡不振，反應(yīng)遲鈍等行為和體征變化，符合絡(luò)氣郁滯證候臨床表現(xiàn)。與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣虛滯/郁滯組生物學(xué)表征評(píng)分顯著增加（P＜0.05，0.01），絡(luò)氣虛滯大鼠末次游泳時(shí)間較第一次顯著縮短（P＜0.01），絡(luò)氣郁滯組大鼠尾懸掛不動(dòng)時(shí)間明顯延長(zhǎng)，掙扎次數(shù)明顯減少，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P＜0.01)。
　　 2.2絡(luò)氣虛滯/郁滯證候大鼠血漿酰肉堿代謝輪廓及通絡(luò)干預(yù)研究
　　 多變量分析顯示：絡(luò)氣虛滯與絡(luò)氣郁滯大鼠模型

15、均可導(dǎo)致血漿酰肉堿代謝輪廓的明顯改變。單變量分析顯示：①與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣虛滯組大鼠血漿共有11個(gè)酰肉堿濃度發(fā)生顯著性變化，其中4個(gè)酰肉堿濃度呈顯著性升高（包括C0、Iso-C4、C5:1及C20:1酰肉堿），7個(gè)酰肉堿濃度呈顯著性降低（包括C2、C8:1、C10:2、C4-OH、C5-OH、C14-OH及C16-OH酰肉堿），P＜0.05，0.01。②與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣郁滯組大鼠血漿共有20個(gè)酰肉堿的濃度發(fā)生顯著性的變化，其中

16、19個(gè)酰肉堿濃度呈顯著性升高（包括C10:1、C12、C14、C14-OH、C14:1、C14:2、C16、C16-OH、C16:1、C16:1-OH、C16:2、C18、C18:1、C18:1-OH、C18:2、C18:2-OH、C20:0、C20:1及C20:2酰肉堿），1個(gè)酰肉堿濃度呈顯著性降低(C5-OH)，P＜0.05，0.01。③與絡(luò)氣郁滯組比較，絡(luò)氣虛滯組大鼠血漿共有23個(gè)酰肉堿的濃度發(fā)生顯著性變化，其中2個(gè)酰肉堿濃度顯著

17、性升高（包括C0、C5:1酰肉堿），21個(gè)酰肉堿濃度顯著性降低(C4-OH、C5-OH、C8:1、C10:1、C10:2、C12、C14、C14-OH、C14:1、C16、C16-OH、C16:1、C16:1-OH、C16:2、C18、C18:1、C18:1-OH、C18:2、C18:2-OH、C20:0及C20:2酰肉堿）P＜0.05，0.01。
　　 多變量分析顯示：人參組與絡(luò)氣虛滯組聚集性較強(qiáng)，且與正常對(duì)照組呈現(xiàn)出明顯的分

18、離趨勢(shì)，表明人參干預(yù)的絡(luò)氣虛滯大鼠模型血漿酰肉堿代謝輪廓未恢復(fù)到正常對(duì)照組水平。薤白組則與正常對(duì)照組聚集性較強(qiáng)，而與絡(luò)氣郁滯組呈現(xiàn)出明顯的分離趨勢(shì)，表明薤白干預(yù)的絡(luò)氣郁滯大鼠模型血漿酰肉堿代謝輪廓恢復(fù)到正常對(duì)照組水平。單變量分析：①與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣虛滯大鼠血漿中呈顯著性變化的酰肉堿中，有3個(gè)(C0、Iso-C4及C5:1酰肉堿)經(jīng)人參干預(yù)后調(diào)節(jié)至正常水平(P＞0.05)。與絡(luò)氣虛滯組比較，人參干預(yù)后其余酰肉堿有上調(diào)和下調(diào)趨勢(shì)，但均

19、無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。②與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣郁滯大鼠血漿中呈顯著性變化的酰肉堿中，除了C18:2、C20:2、C5-OH及C18:2-OH等4個(gè)酰肉堿，其余16個(gè)酰肉堿分子經(jīng)薤白干預(yù)后均調(diào)節(jié)至正常組水平（P＞0.05）；與絡(luò)氣郁滯組比較，薤白組大鼠血漿中有18個(gè)酰肉堿濃度發(fā)生顯著性下調(diào)（P＜0.05）；2個(gè)酰肉堿（C18和C5-OH）濃度無明顯變化(P＞0.05)。
　　 2.3絡(luò)氣虛滯/郁滯證候大鼠血漿脂類代謝輪廓及

20、通絡(luò)干預(yù)研究
　　 多變量分析：絡(luò)氣虛滯、絡(luò)氣郁滯大鼠模型均可導(dǎo)致血漿脂類代謝輪廓的明顯改變。單變量分析：①與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣虛滯組大鼠血漿共有31個(gè)脂類濃度發(fā)生顯著性變化，其中僅有2個(gè)LPC分子[LPC(18:1)和LPC(18:2)]呈顯著性升高(P＜0.05，0.01)，1個(gè)LPC分子[LPC(20:4)]、1個(gè)LPE分子[LPE(22:6)]、6個(gè)磷脂酸膽堿（具有降脂作用）[PC(32:0)、PC(36:4)、PC(

21、38:4)、PC(38:5)、PC(38:6)和PC(40:6)]及21個(gè)TG分子[TG(50:1)、TG(50:2)、TG(50:3)、TG(52:2)、TG(52:4)、TG(52:5)、TG.(54:3)、TG(54:4)、TG(54:5)、TG(54:6)、TG(54:7)、TG(56:6)、TG(56:7)、TG(56:8)、TG(56:9)、TG(58:8)、TG(58:9)、TG(58:10)、TG(58:11)、TG(6

22、0:12)和TG(60:13)]均呈顯著性降低（均P＜0.01）。②與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣郁滯組大鼠血漿共有10個(gè)脂類分子的濃度發(fā)生顯著性的變化，其中3個(gè)LPC分子[LPC(18:1)、LPC(18:2)和LPC(O-16:2)]呈顯著性升高(P＜0.05,0.01),5個(gè)PC分子[PC(36:4)、PC(38:4)、PC(38:5)、PC(38:6)和PC(40:6)]及2個(gè)TG分子[TG(60:12)和TG(62:14)]呈顯著性降

23、低(P＜0.05，0.01)。
　　 多變量分析：通絡(luò)干預(yù)研究顯示，人參組與絡(luò)氣虛滯組聚集性較強(qiáng)，且與正常對(duì)照組呈現(xiàn)出明顯的分離趨勢(shì)，表明人參干預(yù)的絡(luò)氣虛滯大鼠模型血漿脂類代謝輪廓未恢復(fù)到正常對(duì)照組水平。薤白組則與正常對(duì)照組聚集性較強(qiáng)，而與絡(luò)氣郁滯組呈現(xiàn)出明顯的分離趨勢(shì)，表明薤白干預(yù)的絡(luò)氣郁滯大鼠模型血漿脂類代謝輪廓恢復(fù)到正常對(duì)照組水平。單變量分析：①與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣虛滯大鼠血漿中呈顯著性變化的脂類中有4個(gè)脂類分子[PC(

24、38:5)、PC(38:6)、PC(40:6)及TG(60:12)]經(jīng)人參干預(yù)后濃度調(diào)節(jié)至正常組的水平(P＞0.05)；與絡(luò)氣虛滯組比較，人參組大鼠血漿中有25個(gè)脂類分子濃度發(fā)生上調(diào)，其中有5個(gè)[PC(36:4)、PC(38:4)、PC(38:6)、PC(40:6)、TG(58:11)]具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05，0.01）；12個(gè)脂類分子[TG(50:1)、TG(52:2)、TG(52:4)、TG(52:5)、TG(54:6)、

25、TG(54:7)、TG(56:7)、TG(56:8)、TG(56:9)、TG(58:9)、TG(58:10)、TG(60:13)]濃度發(fā)生上調(diào)但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。②與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣郁滯大鼠血漿中呈顯著性變化的脂類中，除PC(38:6)，將其余9個(gè)脂類分子濃度均調(diào)節(jié)至正常組水平(P＞0.05)；與絡(luò)氣郁滯組比較，薤白組大鼠血漿中有5個(gè)脂類分子[PC(36:4)、PC(38:4)、PC(38:5)、PC(38:6)、PC(

26、40:6)]濃度發(fā)生顯著性上調(diào)(P＜0.05，0.01)；1個(gè)脂類分子濃度發(fā)生顯著性下調(diào)(LPC18:1)(P＜0.05)。
　　 3 絡(luò)氣虛滯/郁滯證候大鼠血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)功能與主動(dòng)脈、心腦組織CPT-I、磷脂、5-HT受體變化及通絡(luò)干預(yù)研究
　　 3.1絡(luò)氣虛滯/郁滯證候大鼠血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)功能變化及通絡(luò)干預(yù)研究
　　 絡(luò)氣虛滯/郁滯模型組光鏡HE染色顯示：內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，內(nèi)膜增生，可見炎細(xì)胞浸潤(rùn)，內(nèi)彈力膜可見斷裂，內(nèi)

27、膜下腫脹，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，血管壁層次清晰，可見內(nèi)彈性膜及中膜彈性纖維；掃描電鏡顯示：內(nèi)皮細(xì)胞界限消失，細(xì)胞腫脹脫落，皺褶消失；透射電鏡顯示：核周隙擴(kuò)張腫脹，細(xì)胞器減少，細(xì)胞核周可見空泡，核膜模糊不清。與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣虛滯/郁滯組大鼠血清ET-1水平顯著升高(P＜0.05，0.01)，血漿NO水平顯著降低（均P＜0.05）。
　　 絡(luò)氣虛滯/郁滯模型組經(jīng)人參、薤白及通心絡(luò)干預(yù)后一般狀況明顯改善，與絡(luò)氣虛滯/郁滯組比較，各通絡(luò)干預(yù)

28、組生物學(xué)表征評(píng)分顯著下降(P＜0.05，0.01)；與絡(luò)氣虛滯組第14d力竭游泳時(shí)間比較，人參、通心絡(luò)組均不同程度延長(zhǎng)絡(luò)氣虛滯證候大鼠力竭游泳時(shí)間（均P＜0.05）。與絡(luò)氣郁滯組比較，薤白組、通心絡(luò)組大鼠尾懸掛不動(dòng)時(shí)間顯著縮短，掙扎次數(shù)顯著增加，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05，0.01)。光鏡、電鏡結(jié)果顯示各治療組血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)改善，總體評(píng)價(jià)通心絡(luò)組保護(hù)作用優(yōu)于單味通絡(luò)藥物組。與絡(luò)氣虛滯/郁滯組比較，通絡(luò)干預(yù)各組大鼠血清ET-1水平顯著降

29、低，血漿NO水平顯著升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05，0.01)。
　　 3.2絡(luò)氣虛滯/郁滯大鼠主動(dòng)脈、心肌CPT-I變化及通絡(luò)干預(yù)研究
　　 與正常對(duì)照組比較絡(luò)氣虛滯組心肌組織能量負(fù)荷有增高趨勢(shì)，但無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。與正常對(duì)照組、絡(luò)氣郁滯組比較，絡(luò)氣虛滯組大鼠主動(dòng)脈、心肌CPT-I、AMPKa、PPARδmRNA表達(dá)顯著降低（均P＜0.01），主動(dòng)脈、心肌CPT-I、AMPKα、pAMPKa、PP

30、AR6蛋白表達(dá)顯著下調(diào)；與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣郁滯組上述指標(biāo)無顯著變化。
　　 與絡(luò)氣虛滯組比較，人參組和通心絡(luò)組能量負(fù)荷顯著增加（均P＜0.01)，主動(dòng)脈、心肌CPT-I、AMPKα、PPARδmRNA表達(dá)顯著增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，0.01）。人參組大鼠主動(dòng)脈、心肌中CPT-I、AMPKα、pAMPKa蛋白表達(dá)顯著上調(diào)；通心絡(luò)組大鼠主動(dòng)脈、心肌CPTI、AMPKα、pAMPKa、PPAR6蛋白表達(dá)顯著上調(diào)。與絡(luò)氣

31、郁滯組比較，薤白組、通心絡(luò)組上述指標(biāo)無顯著變化。3.3絡(luò)氣虛滯/郁滯大鼠主動(dòng)脈磷脂代謝相關(guān)因子變化及通絡(luò)藥物干預(yù)研究
　　 與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣虛滯/郁滯證候組主動(dòng)脈Lp-PLA2含量顯著提高(均P＜0.01)，與正常對(duì)照組，絡(luò)氣虛滯組大鼠主動(dòng)脈GPR4mRNA表達(dá)顯著上調(diào)（P＜0.01），蛋白表達(dá)亦顯著上調(diào)，絡(luò)氣郁滯組GPR4mRNA和蛋白表達(dá)無顯著變化。
　　 與絡(luò)氣虛滯/郁滯組比較，各通絡(luò)干預(yù)組顯著降低Lp-PL

32、A2含量(P＜0.05，0.01)。與絡(luò)氣虛滯組比較，人參組、通心絡(luò)組大鼠主動(dòng)脈GPR4mRNA表達(dá)顯著降低(P＜0.01)，蛋白表達(dá)亦顯著下調(diào)。
　　 3.4絡(luò)氣虛滯/郁滯大鼠主動(dòng)脈、腦組織5-HT受體變化及通絡(luò)干預(yù)研究
　　 ①與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣虛滯組大鼠腦組織5-HT含量顯著增加(P＜0.01)，絡(luò)氣郁滯組大鼠5-HT含量有降低趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。②與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣虛滯組、絡(luò)氣郁滯組大鼠

33、主動(dòng)脈5-HT1p受體mRNA表達(dá)顯著降低，5-HT2A受體mRNA表達(dá)顯著升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）③與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣虛滯組大鼠腦組織5-HT1D受體、5-HT2A受體TPHmRNA無顯著性變化（均P＞0.05），與正常對(duì)照組、絡(luò)氣虛滯組比較，絡(luò)氣郁滯組大鼠腦組織5-HT1D受體、TPH表達(dá)顯著降低，5-HT2A受體mRNA表達(dá)顯著增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。④與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣虛滯/郁滯組大鼠血管組

34、織5-HT1D受體蛋白表達(dá)顯著下調(diào)，5-HT2A受體蛋白表達(dá)顯著上調(diào)。⑤與正常對(duì)照組比較，絡(luò)氣虛滯組腦組織中5-HT1D受體表達(dá)上調(diào)，絡(luò)氣郁滯組腦組織中5-HT2A受體蛋白表達(dá)顯著上調(diào)。
　　 ①應(yīng)用人參、薤白和通心絡(luò)進(jìn)行干預(yù)后，絡(luò)氣虛滯大鼠腦組織中5-HT含量有增加趨勢(shì)，絡(luò)氣郁滯大鼠5-HT含量有降低趨勢(shì)，但均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05）。②與絡(luò)氣虛滯/郁滯組比較，通絡(luò)干預(yù)各組大鼠主動(dòng)脈5-HT1D受體mRNA表達(dá)顯著增加，

35、5-HT2A受體mRNA表達(dá)顯著降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，0.01)，人參組和通心絡(luò)、薤白和通心絡(luò)組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05）。③與絡(luò)氣郁滯組比較，薤白組、通心絡(luò)組大鼠腦組織5-HT1D受體mRNA表達(dá)顯著增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05)，5-HT2A受體mRNA表達(dá)顯著降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。薤白組和通心絡(luò)組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05）。④人參、薤白、通心絡(luò)干預(yù)后可顯著主動(dòng)脈上調(diào)5-HT1D受

36、體蛋白表達(dá)，下調(diào)5-HT2A受體蛋白表達(dá)。⑤人參、通心絡(luò)干預(yù)后可顯著提高腦組織5-HT1D受體蛋白表達(dá)；通心絡(luò)干預(yù)后可顯著下調(diào)絡(luò)氣郁滯組5-HT2A受體表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 1 首次以脈絡(luò)學(xué)說為指導(dǎo)，采用代謝組學(xué)方法探討絡(luò)氣虛滯/郁滯證候亞健康人群和模型大鼠病生理學(xué)基礎(chǔ)，為揭示過勞、抑郁等社會(huì)心理行為因素在血管病變發(fā)病中的始動(dòng)作用提供了新的研究思路
　　 本研究以脈絡(luò)學(xué)說核心理論營(yíng)衛(wèi)承制調(diào)平和氣血相關(guān)理論為

37、指導(dǎo)，基于3469例血管病變患者臨床調(diào)查揭示的絡(luò)氣虛滯/郁滯為“脈絡(luò)-血管系統(tǒng)病的始動(dòng)因素并貫穿病變?nèi)^程，以西醫(yī)診斷無明顯病變但具備絡(luò)氣虛滯/郁滯證候判定標(biāo)準(zhǔn)的亞健康人群和模擬絡(luò)氣虛滯/郁滯證候表現(xiàn)建立的大鼠模型為研究對(duì)象，采用代謝組學(xué)方法研究這兩類證候的病生理學(xué)基礎(chǔ)，為揭示過度疲勞、情緒刺激等社會(huì)心理行為因素在血管病變發(fā)病中的始動(dòng)作用提供了新的研究思路。
　　 2 通過代謝組學(xué)和代謝輪廓分析，初步揭示了絡(luò)氣虛滯/郁滯證候人群

38、血漿代謝物譜特征和證候大鼠酰肉堿、脂類代謝物譜特征，為社會(huì)心理行為因素所致亞健康人群的早期篩查提供代謝組學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)
　　 絡(luò)氣虛滯和絡(luò)氣郁滯證候人群血漿代謝物譜均發(fā)生變化，提示兩類證候具有其代謝物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)兩證候間代謝物譜亦存在差異，其中前者表現(xiàn)為氨基酸代謝（苯丙氨酸、色氨酸略增加）和脂代謝異常（多個(gè)LPC顯著降低）；后者則表現(xiàn)為氨基酸代謝（色氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸顯著增加）、脂代謝(LPC顯著降低)及能量代謝（乙酰肉堿略增加

39、）和血紅素氧合酶降解途徑（膽紅素增加）的變化，佐證了脈絡(luò)學(xué)說指導(dǎo)下辨證分型的科學(xué)性。研究結(jié)果顯示色氨酸、苯丙氨酸可能是預(yù)測(cè)過度疲勞、情緒抑郁亞健康人群發(fā)生高血壓的重要代謝標(biāo)記物，LPC則可能是預(yù)測(cè)高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化及血管內(nèi)皮功能障礙病理?yè)p傷的重要代謝標(biāo)記物。
　　 絡(luò)氣虛滯和郁滯證候大鼠血漿酰肉堿和脂類代謝均發(fā)生異常變化，前者以酰肉堿和脂類濃度降低為主，可能與介導(dǎo)能量代謝過程中線粒體脂肪酸β氧化過程限速反應(yīng)的CPT-I不足和

40、脂肪動(dòng)員造成脂質(zhì)過度消耗有關(guān)；后者以酰肉堿濃度升高和LPC升高為主，可能是長(zhǎng)鏈?；鈮A堆積導(dǎo)致代謝毒性損傷和LPC介導(dǎo)的血管內(nèi)皮功能障礙的重要機(jī)制之一。此外PC(36:4)、PC(38:6)、PC(40:6)降低有可能是預(yù)測(cè)絡(luò)氣虛滯/郁滯亞健康狀態(tài)下發(fā)展為高脂血癥的重要代謝標(biāo)記物。
　　 3 揭示了絡(luò)氣虛滯/郁滯證候均可導(dǎo)致血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)功能損傷，并可引發(fā)心肌能量代謝和腦組織5-HT及其受體調(diào)節(jié)異常
　　 圍繞代謝組學(xué)研究

41、結(jié)果，從能量、磷脂、色氨酸代謝相關(guān)細(xì)胞因子和受體表達(dá)，探討證候因素對(duì)血管、心肌、腦組織的影響，證實(shí)過度疲勞和情緒刺激所致絡(luò)氣虛滯/郁滯證候均可引起血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)與功能損傷，可能與CPT-ImRNA和蛋白表達(dá)降低、調(diào)控LPC生成的Lp-PLA2水平升高及介導(dǎo)舒張/收縮血管作用的5-HT1D/5-HT2A受體表達(dá)下調(diào)/上調(diào)有關(guān)；可引起絡(luò)氣虛滯證候大鼠心肌能量代謝障礙，可能與AMPKa及其磷酸化、PPARδ通路抑制導(dǎo)致CPT-ImRNA和蛋白表

42、達(dá)降低有關(guān)，其中心肌能量負(fù)荷代償性增加，成為營(yíng)衛(wèi)承制調(diào)平“制”的代償性調(diào)節(jié)具體體現(xiàn)；此外腦組織中5-HT水平增加/降低及其受體表達(dá)異常，可能是絡(luò)氣虛滯/郁滯證候誘發(fā)高血壓，出現(xiàn)中樞疲勞和心境抑郁的重要發(fā)病機(jī)制之一。
　　 4 通絡(luò)干預(yù)可有效的調(diào)節(jié)絡(luò)氣虛滯/郁滯證候代謝物譜、主動(dòng)脈、心肌及腦組織病理改變，體現(xiàn)了通絡(luò)干預(yù)病證法藥關(guān)聯(lián)性的科學(xué)內(nèi)涵，亦反映出復(fù)方通絡(luò)藥物整體調(diào)節(jié)的系統(tǒng)效應(yīng)，實(shí)現(xiàn)由“調(diào)”至“平”的自穩(wěn)態(tài)
　　 針對(duì)

43、絡(luò)氣虛滯/郁滯證候分別選用益氣通絡(luò)的人參和流氣暢絡(luò)的薤白及脈絡(luò)學(xué)說指導(dǎo)下通絡(luò)代表性藥物通心絡(luò)進(jìn)行干預(yù)，其中人參和薤白均可不同程度的調(diào)節(jié)絡(luò)氣虛滯/郁滯證候狀態(tài)下機(jī)體血漿酰肉堿和脂類代謝紊亂。各通絡(luò)藥物均可有效保護(hù)血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)與功能完整性，通絡(luò)干預(yù)可能通過進(jìn)一步提高CPT-I的表達(dá)，增加絡(luò)氣虛滯證候大鼠心肌能量負(fù)荷，激活主動(dòng)脈和心肌AMPK及其磷酸化與PPARδ通路增加CPT-I的表達(dá)，從而改善組織能量代謝；可能通過降低主動(dòng)脈Lp-PLA2

44、水平和GPR4mRNA及蛋白表達(dá)，抑制LPC介導(dǎo)的血管內(nèi)皮功能障礙；同時(shí)可調(diào)節(jié)主動(dòng)脈、腦組織中5-HT1D和5-HT2A受體的表達(dá)及腦組織中5-HT含量。
　　 5 基于臨床和實(shí)驗(yàn)代謝組學(xué)研究結(jié)果，提出“超前干預(yù)、辨證施調(diào)”的血管病變?cè)缙诟深A(yù)策略
　　 本研究通過證候人群和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，初步揭示了絡(luò)氣虛滯/郁滯證候的代謝組學(xué)特征及其對(duì)血管、心腦重要臟器的影響，提示過度疲勞、情緒抑郁等社會(huì)心理行為因素是血管病變發(fā)病的重要始動(dòng)因