冬凌草甲素經線粒體通路誘導人食管癌細胞凋亡的研究.pdf

1、目的:
　　研究冬凌草甲素(oridonin, ORI)體外抗腫瘤作用及ORI誘導人食管癌細胞凋亡的作用機制。
　　方法:
　　用不同濃度ORI分別作用人食管癌SHEEC細胞株不同時間,噻唑藍比色法(MTT)檢測細胞生長抑制率;透射電鏡觀察細胞凋亡尤其是線粒體的超微結構改變;原位末端標記/碘化吡啶( TUNEL/PI)雙染流式細胞術檢測細胞凋亡率和細胞周期;羅丹明123(Rho123)染色流式細胞術檢測線粒體膜電位(△

2、ψm);Western blot檢測相關蛋白的表達變化;RT-PCR檢測相關基因的表達變化。
　　結果:
　　在體外抗腫瘤作用方面,ORI對 SHEEC細胞的生長有顯著的抑制效應,64μg/ml的ORI作用24h、48h及72h對SHEEC細胞生長的抑制率分別為78.7％、89.5%及91.7%;8、16、32μg/ml的ORI作用24h后,透射電鏡下均觀察到多數(shù)細胞核呈明顯的染色質凝塊邊集的凋亡現(xiàn)象;流式細胞儀檢測凋亡率分

3、別為9.3%、21.1%和47.7%,同步細胞周期圖像顯示凋亡峰趨于明顯,同時有S期的逐漸抬高。
　　在誘導細胞凋亡的機制方面,32μg/ml的ORI作用2h后,電鏡下可見線粒體在細胞核出現(xiàn)變化之前已發(fā)生形狀改變,作用8h后,線粒體內部結構消失,細胞核呈細胞凋亡的典型改變;8、16、32μg/ml的ORI作用24h,Rho(-)細胞比例分別是3.2%、9.8%和45.7%,同時檢測到蛋白細胞色素C(CytC)、Caspase-9表