Her-2-neu抗獨(dú)特型單克隆抗體的制備和初步研究.pdf

1、本研究擬研制Her-2/neu抗獨(dú)特型單克隆抗體,為下一步深入研究Her-2/neu陽性乳腺癌抗獨(dú)特型抗體疫苗奠定基礎(chǔ)。在許多惡性腫瘤中都有Her-2/neu的大量增殖或高表達(dá)并且提示著較差的預(yù)后。因此Her-2/neu作為一種腫瘤相關(guān)抗原是腫瘤免疫治療的一個有效的靶點(diǎn)。Her-2/neu的抗獨(dú)特型抗體可以模擬Her-2/neu的特異性表位,使其可以代替作為腫瘤相關(guān)抗原的Her-2/neu刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的免疫作用。因此Her-2/ne

2、u抗獨(dú)特型抗體疫苗可以作為一種Her-2/neu陽性腫瘤免疫治療的新手段。在我們的實(shí)驗(yàn)中,我們用赫賽汀免疫Balb/c小鼠,通過雜交瘤技術(shù)獲得Her-2/neu抗獨(dú)特型單克隆抗體。共得到三株能分泌Her-2/neu抗獨(dú)特性單克隆抗體的細(xì)胞株,分別命名為:1F5、2D1、2C4。亞類檢測顯示:1F5為IgG3、2D1為IgG2b、2C4為IgG1。mAb2未濃縮腹水效價分別是:1F5為1:1.02-2.04×104、2D1為1:3.2-6

3、.4×103、2C4為1:160-320。根據(jù)腹水效價,我們采用1F5和2D1的細(xì)胞株進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。通過競爭性抑制ELISA試驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)1F5和2D1可以競爭Her-2/neu同抗Her-2/neu兔多克隆抗體的結(jié)合。我們用1F5和2D1免疫兔獲得含有抗Her-2/neu抗獨(dú)特型抗體的血清,并且證實(shí)Ab3可以和Her-2/neu特異性的結(jié)合。這些結(jié)果可以證明1F5和2D1是可以替代Her-2/neu的β型Her-2/neu抗獨(dú)特型單克

4、隆抗體。根據(jù)血清中Ab3的滴度選擇1F5誘生的Ab3做后續(xù)試驗(yàn)。通過MTT實(shí)驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)不同濃度的pAb3可以抑制Her-2/neu表達(dá)陽性腫瘤細(xì)胞系(SK-BR-3)在體外的生長,并且實(shí)驗(yàn)組的抑制率同對照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。
　　綜上所述,我們利用現(xiàn)有條件首先在國內(nèi)篩選制備出了Her-2/neu抗獨(dú)特型單克隆抗體,并對其中一株的腫瘤疫苗性進(jìn)行了進(jìn)一步的研究,為乳腺癌的免疫治療提供可能的新的疫苗的候選。Her-2/