斛芪浸膏對小鼠胸腺細胞輻射損傷的保護作用.pdf

1、研究目的：
　　 通過實驗探討中藥復(fù)方制劑斛芪浸膏是否具有維持60Co輻照后的離體小鼠胸腺細胞的細胞活力，以及抑制細胞凋亡和減輕電離輻射所致細胞氧化損傷的作用。
　　 研究方法：
　　 取4-8周健康雄性昆明小鼠，分離胸腺淋巴細胞作原代培養(yǎng)，孵育4小時后，分為對照組(CG)、輻照組(IG)、輻照加低劑量斛芪浸膏組(ILHEG)、輻照加中劑量斛芪浸膏組(IMHEG)及輻照加高劑量斛芪浸膏組(IHHEG)。對照組及輻

2、照組添加不含斛芪浸膏藥物的RPMI1640培養(yǎng)液，輻照加低劑量斛芪浸膏組、輻照加中劑量斛芪浸膏組、輻照加高劑量斛芪浸膏組分別添加等量相應(yīng)濃度的斛芪浸膏溶液，作用10小時。除對照組外，其余各組均采用60COγ射線5Gy單次輻照。
　　 (1)于輻照后12、24、36、48小時，分別用四唑鹽比色法檢測各組細胞吸光度A值。輻照后第10、24小時，分別用顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化。輻照后10小時，用PI和Annexin-V雙標記，流式細胞儀

3、檢測各組細胞早期凋亡比例；輻照后24小時，提取各組細胞總DNA，用瓊脂糖凝膠電泳法檢測細胞凋亡，觀察DNA損傷情況。
　　 (2)輻照后30分鐘內(nèi)分別用流式細胞儀及超氧化物檢測試劑盒檢測各組細胞內(nèi)活性氧熒光強度及超氧化物含量。
　　 結(jié)果：
　　 (1)輻照后12-24小時，輻照組細胞活力呈下降趨勢，對照組細胞活力水平高于輻照組，輻照加低、中、高斛芪浸膏各組細胞活力均呈現(xiàn)上升趨勢，24小時以后，各組細胞活力均開始

4、下降，但輻照加低、中、高劑量斛芪浸膏各組細胞活力水平明顯高于對照組及輻照組，且呈現(xiàn)劑量依賴性，輻照后36小時，輻照加低、中、高劑量組與輻照組比較，細胞活力差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。輻照后第10、24小時，顯微鏡下觀察，輻照加斛芪浸膏各組細胞變性、固縮變小等細胞壞死、凋亡等表現(xiàn)與輻照組比較相對較輕。輻照后10小時，輻照加低、中、高劑量斛芪浸膏各組細胞早期凋亡比例均低于輻照組，其中高劑量組與輻照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05

5、)。輻照后24小時，輻照組及輻照加低、中、高劑量斛芪浸膏各組細胞總DNA經(jīng)電泳后均出現(xiàn)了典型的DNA階梯狀斷裂條帶，但輻照加低、中、高劑量斛芪浸膏各組DNA損傷相對較輕，輻照加高劑量斛芪浸膏組作用最明顯。
　　 (2)與輻照組比較，輻照加中、高劑量斛芪浸膏組細胞內(nèi)活性氧強度(P<0.01)及超氧化物水平(P<0.01)有不同程度下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。輻照加中劑量斛芪浸膏組與輻照加高劑量斛芪浸膏組作用比較無明顯差別(P>0.05