2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
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文檔簡介

1、酚氧化酶原(proPO)是對蝦類體液免疫的特異性因子之一，在對蝦免疫過程中具有十分重要的作用，建立proPO的體外表達系統(tǒng)對于深入研究對蝦proPO參與免疫的過程及作用具重要意義。 本研究將斑節(jié)對蝦proPO基因克隆進原核表達載體pET-28a(+)，在大腸桿菌中表達，SDS-PAGE和Western blot顯示在78.5 kDa附近有一條特異性條帶。采用低溫誘導(dǎo)表達后可直接檢測到酚氧化酶(PO)的活性，對表達后形成的包涵體進

2、行變復(fù)性處理后也可檢測到PO的活性。 將proPO基因克隆進昆蟲細(xì)胞表達載體pIZT/V5-His，轉(zhuǎn)染草地貪夜蛾(Sf 9)細(xì)胞，在熒光顯微鏡下可觀察到綠色熒光。經(jīng)過Zeocin<'TM>抗生素篩選后，轉(zhuǎn)基因細(xì)胞陽性率約在70％以上。用PCR可在細(xì)胞中檢測到相應(yīng)的GFP和proPO序列；SDS-PAGE檢測可在Sf9細(xì)胞中可以檢測到一條分子量約為67 kDa的特異性條帶，并且具有PO的酶活性，顯示proPO在Sf9細(xì)胞中得到成

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