大鼠腦外傷后腦組織P-selectin、ICAM-1基因表達(dá)及EGB干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的 顱腦損傷時(shí)，除外力直接作用造成腦損害外，同時(shí)發(fā)生一系列繼發(fā)性病理改變。腦損傷后可引起腦微血管改變與微循環(huán)障礙，從而導(dǎo)致繼發(fā)性腦組織缺血和腦代謝的變化，加重腦水腫。顱腦損傷后的炎性反應(yīng)和腦微循環(huán)紊亂在這個(gè)過程中起重要作用。P-選擇素(P-selectin)，又叫血小板α-顆粒膜蛋白(α—granule membrane protein-140，GMP-140)是血小板活化釋放的特異性指標(biāo)之一，可以反映體內(nèi)血小板的活化程度及血栓形成

2、傾向；細(xì)胞間粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-l，ICAM-l)是機(jī)體重要的炎性介質(zhì)之一，是內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞損害或激活的標(biāo)志；銀杏葉提取物(Extract of Ginkgo bi loba，EGB)是從銀杏科植物銀杏葉中分離純化的提取物。本實(shí)驗(yàn)研究大鼠腦外傷后P-選擇素和ICAM-1的表達(dá)變化及其與腦水腫等繼發(fā)性腦損傷的關(guān)系，探討顱腦損傷后腦水腫的分子機(jī)制以及EGB的干預(yù)作用，為臨床治療提供

3、理論依據(jù)。 方法 第一部分參照Feeney's自由落體致傷法，制作大鼠大腦頂葉局灶皮質(zhì)挫裂傷模型，將72只Spragtle-Dawley大鼠隨機(jī)分為3組：A(標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照組)、B(輕度損傷組)、C組(重度損傷組)，每組24只。分別于腦外傷后6小時(shí)、24小時(shí)、3天、7天隨機(jī)各取標(biāo)本6只，測(cè)定腦含水量，應(yīng)用HE染色法觀察各時(shí)段腦組織病理變化，采用免疫組化方法，應(yīng)用P-選擇素和細(xì)胞間粘附分子-1抗體檢測(cè)傷后不同時(shí)段大鼠腦組織冰凍切片，檢

4、測(cè)P-選擇素和細(xì)胞間粘附分子一1在腦組織的表達(dá)變化以及免疫陽性染色血管,并獲取傷后不同時(shí)間段損傷灶周圍的腦組織，采用實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)P-選擇素mRNA和細(xì)胞間粘附分子-1mRNA的表達(dá)，采集數(shù)據(jù)，采用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)和SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行處理，P<0.05視為差異具有意義。 第二部分仍參照Feeney's自由落體致傷法，制作大鼠大腦頂葉局灶皮質(zhì)挫裂傷模型，72只SD大鼠隨機(jī)分為3組：A(標(biāo)準(zhǔn)對(duì)

5、照組)，B(小劑量銀杏葉提取物治療組)、C組(大劑量銀杏葉提取物治療組)，每組24只，大鼠模型建立成功后，各治療組大鼠術(shù)后每日分別腹腔注射EGB注射液50mg／kg、100mg／kg加生理鹽水和地塞米松，對(duì)照組注射等量生理鹽水和地塞米松。傷后6小時(shí)、24小時(shí)、3天、7天隨機(jī)各取標(biāo)本測(cè)定腦含水量，采用免疫組織化學(xué)，應(yīng)用P-選擇素和細(xì)胞間粘附分子-1抗體檢測(cè)P-選擇素及細(xì)胞間粘附分子-1在腦組織的表達(dá)變化以及免疫陽性染色血管，取傷后不同時(shí)間

6、段損傷灶周圍腦組織行實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)，檢測(cè)P-選擇素mRNA和細(xì)胞間粘附分子-1mRNA表達(dá)，采集數(shù)據(jù)，采用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)和SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行處理，與對(duì)照組比較，P<0.05視為差異具有意義 結(jié)果致傷后見損傷灶硬膜下出血，腦皮質(zhì)挫裂，壞死和水腫，血栓形成，周圍神經(jīng)元變性，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生。腦損傷后腦皮層的含水量于致傷后6小時(shí)增加，24小時(shí)達(dá)到高峰，持續(xù)約3-5天，7天后接近正常。腦外傷后6小時(shí)，P

7、-選擇素和細(xì)胞間粘附分子-l的表達(dá)顯著升高，于傷后24小時(shí)達(dá)到高峰，3天后逐漸降低，7天后接近正常。其中細(xì)胞間粘附分子-l高峰期出現(xiàn)較晚。腦損傷后損傷灶周圍可見大量免疫陽性染色血管，粒細(xì)胞在損傷灶周圍和側(cè)腦室浸潤(rùn)。重傷組和輕傷組P-選擇素和細(xì)胞間粘附分子-1陽性表達(dá)與對(duì)照組平均積分光密度值各時(shí)段均存在顯著差異(P<0.05)。 銀杏葉提取物治療組大鼠損傷灶皮質(zhì)腦含水量顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，且大劑量銀杏葉提取物治療組大鼠

8、的腦含水量最少。銀杏葉提取物治療組在6小時(shí)以后亦出現(xiàn)P-選擇素和細(xì)胞間粘附分子-l表達(dá)，但陽性細(xì)胞染色淺，數(shù)目較少。傷后24小時(shí)和3天，P-選擇素和細(xì)胞間粘附分子-1表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)目明顯減少。銀杏葉提取物治療組與對(duì)照組在皮質(zhì)損傷邊緣和側(cè)腦室壁等均有P-選擇素和細(xì)胞間粘附分子-1陽性表達(dá)，而且平均積分光密度值各時(shí)段均亦存在顯著差異(P<0.01)。 結(jié)論大鼠腦損傷后腦組織內(nèi)P-選擇素和細(xì)胞間粘附分子-1的表達(dá)及粒細(xì)胞浸潤(rùn)顯著升高，

9、其變化規(guī)律與腦外傷后腦水腫等繼發(fā)性損傷的發(fā)展規(guī)律相吻合。P-選擇素和細(xì)胞間粘附分子-1表達(dá)的增加可能參與了腦外傷后的繼發(fā)性損傷。銀杏葉提取物可以減少P-選擇素和細(xì)胞間粘附分子-1表達(dá)及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，明顯減輕神經(jīng)細(xì)胞的損傷，其對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)作用可能與抑制P-選擇素和細(xì)胞間粘附分子-l的表達(dá)有關(guān)，而且大劑量組(100mg／kg)作用明顯，小劑量組(50mg／kg)作用稍差。銀杏葉提取物可以試用于治療腦外傷，改善微循環(huán)，減輕炎性反應(yīng)，促進(jìn)神