磁性吉西他濱隱形納米脂質(zhì)體的制備及其磁控靶向抑瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的：
　　 通過傳統(tǒng)的途徑給予抗癌藥物，不僅化療指數(shù)低，病人順從性差，而且為了達(dá)到最佳的治療效果，往往給藥劑量偏大，使得藥物毒副作用增大，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，正常細(xì)胞也受到不同程度的損傷。本研究的目的擬采用復(fù)合磁性納米靶向治療，將抗癌藥物和磁性隱形納米脂質(zhì)體相結(jié)合，通過體外定向磁場(chǎng)的磁性導(dǎo)向機(jī)制，將包裹藥物的磁性隱形納米脂質(zhì)體定向聚集于腫瘤部位，增加腫瘤靶區(qū)組織里的藥物濃度，達(dá)到提高療效，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間，降低藥物毒副反

2、應(yīng)的目的，并為臨床腫瘤化療提供一種新的方法和途徑。
　　 研究方法：
　　 在本系列實(shí)驗(yàn)中，我們首先采用化學(xué)共沉淀法制備Fe3O4磁流體，觀察其理化性質(zhì)，并按不同劑量分別用腹腔注射法、口服法和靜脈注射法對(duì)小白鼠進(jìn)行給藥，研究小白鼠的急性毒性反應(yīng)和主要臟器的病理學(xué)改變。
　　 在此基礎(chǔ)上以正交設(shè)計(jì)進(jìn)行方法的優(yōu)化和篩選，采用逆相蒸發(fā)法研制出磁性吉西他濱隱形納米脂質(zhì)體(MGSL)，同時(shí)考察MGSL的理化性質(zhì)如粒徑、粒度

3、分布、包封率、載藥量、穩(wěn)定性和體外磁響應(yīng)性等各項(xiàng)因素。
　　 探討MGSL體外抑瘤作用。通過觀察MGSL誘導(dǎo)的乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡過程中的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變、MTT法獲得MGSL作用乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率、流式細(xì)胞儀分析MGSL引起的細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期分布等。研究MGSL誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測(cè)定乳腺癌MCF-7細(xì)胞中bcl-2，survivin和p53的mRNA表達(dá)水平的改變；

4、Westernblot方法分析MGSL治療后上述基因的蛋白表達(dá)情況。
　　 考察無磁場(chǎng)狀態(tài)下MGSL在兔體內(nèi)代謝動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)；其次對(duì)昆明小鼠身體一端即腦組織表面施加磁場(chǎng)，通過對(duì)腦組織藥物含量的分析，確定了MGSL在體內(nèi)的磁響應(yīng)性；最后在有磁場(chǎng)和無磁場(chǎng)的不同情況下，通過對(duì)小鼠腦、心、肝、脾、肺、腎等組織的藥物含量分析，考察其在小鼠體內(nèi)的分布差異，比較磁性靶向作用和單純給藥在組織分布的差異。
　　 以裸鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，制成裸鼠

5、乳腺癌皮下移植瘤模型，通過對(duì)該模型尾靜脈注射MGSL，移植瘤表面定時(shí)給予三維立體梯度磁場(chǎng)作用，觀察MGSL靶向治療裸鼠乳腺癌的效果。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 經(jīng)化學(xué)共沉淀法制備的Fe3O4磁流體為黑褐色膠體混懸液，平均粒徑為19.920nm。小鼠對(duì)醫(yī)用納米級(jí)Fe3O4磁流體的腹腔注射LD50>1624.5mg/kg，ED0為339.60mg/kg；口服LD50>2166.00mg/kg，ED0為339.60mg/kg；靜

6、脈注射LD50>451.25mg/kg，ED0為169.80mg/kg。主要臟器未見明顯的病理改變。
　　 經(jīng)正交設(shè)計(jì)、采用逆相蒸發(fā)法研制出MGSL的平均粒徑為206.6nm，分散系數(shù)為0.204，粒度分布窄，大小均勻；其載藥量為(10.4±0.7)[％]，包封率為(81.7±5.1)[％]；體外磁響應(yīng)性好。
　　 在體外，MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MGSL在體外對(duì)人乳腺癌細(xì)胞有明顯的的殺傷作用，其抑制乳腺癌細(xì)胞呈劑量-時(shí)間依賴

7、性；乳腺癌細(xì)胞細(xì)胞周期分布結(jié)果顯示MGSL是主要作用于S期的細(xì)胞周期藥物；另外流式細(xì)胞術(shù)也證實(shí)了MGSL還有促乳腺癌細(xì)胞凋亡的作用，其誘導(dǎo)凋亡率達(dá)到51.62[％]。
　　 半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和Western blot結(jié)果顯示經(jīng)過MGSL處理后，腫瘤細(xì)胞中bcl-2、survivin和p53的表達(dá)下調(diào)。證明MGSL能夠通過影響bcl-2、survivin和p53的表達(dá)下調(diào)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。單次給予MGSL，其體

8、內(nèi)藥物代謝動(dòng)力學(xué)符合二室模型，其分布半衰期、消除半衰期、藥-時(shí)曲線下面積、表觀分布容積和消除率較單純的吉西他濱有著顯著性差異，表現(xiàn)出較好的體內(nèi)緩釋效應(yīng)；實(shí)驗(yàn)證實(shí)MGSL在體內(nèi)也有較好的磁響應(yīng)性，應(yīng)用外加磁場(chǎng)，吉西他濱可以有效聚集到靶部位，顯著提高病灶部位吉西他濱的濃度，降低心臟、腎臟等器官的藥物濃度。
　　 制成裸鼠乳腺癌模型，并在尾靜脈注入MGSL，體外立體梯度磁場(chǎng)定位于移植瘤，可以顯著抑制腫瘤組織的生長(zhǎng)，較其它組別腫瘤抑制率

9、明顯提高。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)論：
　　 本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果提示，優(yōu)化制備的MGSL有可能作為新型的化療藥物在腫瘤化療方面發(fā)揮積極的作用，除了提高所攜帶的吉西他濱的穩(wěn)定性、減低其毒副反應(yīng)、延長(zhǎng)其作用時(shí)間、減少其給藥量及給藥頻率以外，還能在定向于腫瘤部位的外磁場(chǎng)作用下有效提高腫瘤組織內(nèi)化療藥物濃度，顯著抑制腫瘤組織的生長(zhǎng)，發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)。本研究中所獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)也為MGSL作為化療藥物進(jìn)一步應(yīng)用于臨床腫瘤治療奠定了基礎(chǔ)。通過這