鋰-匹羅卡品致大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后腦內(nèi)神經(jīng)元的凋亡觀察.pdf

1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文鋰匹羅卡品致大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后腦內(nèi)神經(jīng)元的凋亡觀察姓名：魏昕申請學位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學指導教師：高旭光2001.4.1一~~~~~~.........供，體重180一2208。隨機分為10組，每組5只。A組:正常對照組B組:SE1小時組C組:SE2小時組DEFGHIJ分別為SE后2h4h6h8h1天、3天、5天、7天組。用銼一匹羅卡品誘發(fā)大鼠SE。大鼠腹腔注射氯化鏗3mqkg16小時后給予腹腔注射匹羅卡品4

2、0m擴kg澳化甲基阿托品1mgkg誘發(fā)大鼠SE.SE后2h給予大鼠腹腔注射安定10mgkg、苯巴比妥鈉25mgkg及阿托品1mgkg終止實驗。各組動物達到預定時點后，給予10%水合氯醛35mgkg麻醉，剪開胸腔，充分暴露心臟，左心室插管，剪開右心耳，先以肝素化生理鹽水100m1快速灌流沖洗血液后，以4%多聚甲醛一0.1M磷酸鹽緩沖液(PH7.4)500m1灌流固定，固定充分后，開顱取全腦，置相同固定液中后固定。將固定好的標本置于40C3

3、0%蔗糖溶液中浸泡24小時，自額極5nmi處開始切取2mm厚的冠狀腦片，人恒冷切片機切成6Lm厚的切片，附于鉻明礬明膠處理過的載玻片上，每只大鼠取2張切片進行TUNLE染色。TUNEL試劑盒為武漢博士德生物工程有限公司產(chǎn)品。TUNEL染色的步驟為3%過氧化氫處理10分鐘，消除內(nèi)原性過氧化氫酶活性，蒸餾水沖洗3次，每次2分鐘滴加PBS1100新鮮稀釋ProteinaseK37℃消化2分鐘，蒸餾水沖洗3次，每次2分鐘滴加標記緩沖液稀釋的末端

4、脫氧核糖核酸(TdT)和DIG一dUTP20W1片，37℃標記2小時，PBS洗滌3次，每次2分鐘滴加封閉液50PI片，室溫30分鐘，甩掉封閉液滴加封閉液1100稀釋生物素化抗地高辛抗體，50w1片，37℃反應30分鐘，PBS沖洗3次，每次2分鐘，滴加PBS1100稀釋SABC37℃反應30分鐘，PBS沖洗4次，每次5分鐘滴加DAB溶液染色，觀察顯色情況，自來水終止反應，蘇木素復染3分鐘，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。陰性對照: