羊膜組織封閉視網(wǎng)膜裂孔研究.pdf

1、河弦匝甜六蠆臨床醫(yī)學(xué)博士專業(yè)學(xué)位論文羊膜組織封閉視網(wǎng)膜裂孔研究申請(qǐng)人姓名導(dǎo)師專業(yè)二級(jí)學(xué)院研究起止日期交稿日期郝玉華馬景學(xué)教授外科學(xué)河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院2003年9月一2005年4月2005年5月中文摘要增殖和移行，是形成脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜粘連，封閉視網(wǎng)膜裂孔的關(guān)鍵。Koizumi等研究表明，羊膜上皮細(xì)胞和基底膜內(nèi)含有大量的生長(zhǎng)因子如EGF、HGF、KGF、bGFG、TGFB，且某些生長(zhǎng)因子如EGF、bFGF可促進(jìn)視網(wǎng)膜膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和移行。我

2、們采用體外培養(yǎng)兔視網(wǎng)膜MUller細(xì)胞，在培養(yǎng)過程中加入不同濃度的羊膜勻漿，觀察羊膜對(duì)體外培養(yǎng)的兔視網(wǎng)膜MUller細(xì)胞增殖能力的影響，探討羊膜用于治療孔源性視網(wǎng)膜脫離的潛在可能性。方法：1、取第四代經(jīng)免疫組化和電鏡鑒定的兔視網(wǎng)膜MUller細(xì)胞，以3104／ml密度接種于24孔板，3孔／組，培養(yǎng)24小時(shí)后，加入不同濃度羊膜勻漿(800、400、200、100ug／m1)繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，胰蛋白酶消化，細(xì)胞計(jì)數(shù)，繪制劑量效應(yīng)曲線。2、取

3、第四代兔視網(wǎng)膜MUller細(xì)胞，以3104／ml接種予24孔板，3孔／組，24小時(shí)后，每孔加入羊膜勻漿(800ug／m1)條件培養(yǎng)基，孵育12、24、36、48、72、96小時(shí)后檢測(cè)，繪制時(shí)間效應(yīng)曲線。3、取第四代兔視網(wǎng)膜MUller細(xì)胞以3104／ml接種于96孔板，200ul／孔，24小時(shí)后加入不同濃度羊膜勻漿條件培養(yǎng)基(800、400、200、100ug／m1)，培養(yǎng)24、48、96小時(shí)后，用MTT法檢測(cè)MUller細(xì)胞增殖率。4

4、、第四代兔視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞以4104／ml密度接種于預(yù)置有蓋玻片的6孔板中，24小時(shí)后加入不同濃度的羊膜條件培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)后，免疫組化PCNA檢測(cè)。結(jié)果：隨著條件培養(yǎng)基中羊膜勻漿濃度的增加，對(duì)兔視網(wǎng)膜MUller細(xì)胞的增殖效應(yīng)逐漸增強(qiáng)，800ug／ml時(shí)獲得最大增殖效應(yīng)，細(xì)胞增殖率為625％；在羊膜勻漿濃度恒定條件下，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，其對(duì)視網(wǎng)膜MUller細(xì)胞的增殖效應(yīng)逐漸加強(qiáng)，在48小時(shí)即大到較高的增殖效應(yīng)，72、96小

5、時(shí)與48小時(shí)相比無顯著差異。細(xì)胞增殖抗原檢測(cè)結(jié)果，800ug／ml組和400ug／ml組PCNA抗原陽(yáng)性表達(dá)率與對(duì)照組相比具有顯著性差異。結(jié)論：羊膜對(duì)體外培養(yǎng)的兔視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞具有促進(jìn)增殖作用，且呈濃度和時(shí)間倚賴性。羊膜治療孔源性視網(wǎng)膜脫離具有潛在可能性。第三部分羊膜對(duì)兔視網(wǎng)膜MUller細(xì)胞EGFR和NGFR表達(dá)的影響目的：在腦部損傷和疾病過程中，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞可出現(xiàn)一系列的生物化學(xué)改變，如：移行、增殖及星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)膠質(zhì)纖