視網(wǎng)膜和非視網(wǎng)膜抗原誘導(dǎo)EAU的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：以視網(wǎng)膜S-Ag多肽片段(HS-AgP35)和非視網(wǎng)膜抗原(gp-MBP20)作為致敏原，建立具有典型的病理改變和特異性強(qiáng)、發(fā)病率高，復(fù)制性強(qiáng)等特點(diǎn)的自身免疫性葡萄膜炎的動(dòng)物模型，在此基礎(chǔ)上，比較兩種不同自身抗原所致動(dòng)物模型(EAU和EAAU)發(fā)病特點(diǎn)及機(jī)制。 方法：分別用粗提牛視網(wǎng)膜S-Ag(BS-Ag)、HS-AgP35和gp-MBP20與完全福氏佐劑(CFA)等體積混合制成乳劑作為致敏原，免疫Lewis大鼠誘導(dǎo)其產(chǎn)生

2、自身免疫性葡萄膜炎，建立EAU和EAAU動(dòng)物模型；第二次注射抗原后，每天進(jìn)行裂隙燈檢查臨床表現(xiàn)，直至第21天處死，取出眼球進(jìn)行組織病理學(xué)觀察，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法(ELISA)，檢測(cè)大鼠血清的抗體水平，取大鼠脾組織進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)式反應(yīng)(Rt-PCR)檢測(cè)脾組織中IL-4和IFN-γ的mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果：(1)兩種抗原乳制劑均能誘發(fā)Lewis大鼠發(fā)生葡萄膜炎，成功建立EAU動(dòng)物模型，但是BS-Ag組的發(fā)病率僅為60％

3、，而HS-AgP35和gp-MBP20與CFA混合制劑作為致敏原誘發(fā)Lewis大鼠發(fā)生EAU的發(fā)病率為100％，HS-AgP35組眼內(nèi)炎癥的發(fā)展和嚴(yán)重程度明顯高于BS-Ag組(P＜0.01)，而HS-AgP35組和gp-MBP20組眼內(nèi)炎癥的發(fā)展和嚴(yán)重程度無(wú)明顯差異(P＞0.05)，但是，兩組炎癥的表現(xiàn)部位不同，EAU發(fā)生為葡萄膜視網(wǎng)膜炎，EAAU為虹膜睫狀體炎；(2)正常對(duì)照組、BS-Ag組和HS-Ag組大鼠血清抗BS-Ag/HS-A

4、gP35抗體水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，正常對(duì)照組、HS-AgP35組和gp-MBP20組大鼠血清抗HS-AgP35/gp-MBP20抗體水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)；(3)正常對(duì)照組、BS-Ag組和HS-Ag組脾組織中IL-4mRNA和IFN-γmRNA表達(dá)水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，HS-AgP35組和gp-MBP20組的IFN-γmRNA和IL-4mRNA表達(dá)水平均高于正常對(duì)照組(P＜0.01)；而IFN-γmRN

5、A表達(dá)水平在HS-AgP35組和gp-MBP20組比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，IL-4mRNA表達(dá)水平在HS-AgP35組和gp-MBP20組存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。 結(jié)論：1.采用化學(xué)合成人類S-Ag多肽片段(HS-AgP35)作為致敏原，成功建立了具有抗原特異性強(qiáng)，發(fā)病率高，表現(xiàn)典型的EAU動(dòng)物模型，為自身免疫性葡萄膜炎的深入研究提供了更好的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。2.視網(wǎng)膜S-Ag(HS-AgP35)和非視網(wǎng)膜Ag(